การใช้ WLHMS ในการวิเคราะห์สาร การประยุกต์ใช้เครื่องวัดมวลสารควบคู่ (HLC-MSMS) ในการวินิจฉัยทางคลินิก

จากการทบทวนที่ตีพิมพ์ใน Clinical Biochemist Reviews การใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงร่วมกับ tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกได้เพิ่มขึ้นอย่างมากในช่วง 10-12 ปีที่ผ่านมา ผู้เขียนสังเกตว่าความจำเพาะของการวิเคราะห์ HPLC-MS/MS นั้นเหนือกว่าวิธีการทางภูมิคุ้มกันและโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงแบบคลาสสิก (HPLC) อย่างมีนัยสำคัญในการวิเคราะห์โมเลกุลที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำและมีปริมาณงานสูงกว่าก๊าซโครมาโตกราฟี-แมสสเปกโตรเมตรีอย่างมีนัยสำคัญ ( GC-MS) ความนิยมของวิธีการนี้ในการวิเคราะห์ทางคลินิกตามปกติในปัจจุบันได้รับการอธิบายโดยความสามารถเฉพาะตัวของวิธีการนี้

ข้อได้เปรียบหลักของวิธี HPLC-MS/MS คือ:
• ความสามารถในการหาปริมาณโมเลกุลขนาดเล็กได้อย่างแม่นยำ
• การวิเคราะห์สารประกอบเป้าหมายหลายตัวพร้อมกัน
• ความจำเพาะเฉพาะ;
• ความเร็วในการวิเคราะห์สูง

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ได้ให้ความสนใจอย่างมากกับเวลาการวิเคราะห์และเป็นผลให้ปรับปรุงประสิทธิภาพการทำงานของห้องปฏิบัติการ การลดเวลาการวิเคราะห์อย่างมีนัยสำคัญเป็นไปได้โดยการใช้คอลัมน์การวิเคราะห์แบบสั้นสำหรับ HPLC/MS/MS ในขณะที่เพิ่มความจำเพาะของการวิเคราะห์อย่างมาก การใช้ไอออไนซ์ความดันบรรยากาศ (API) แมสสเปกโตรมิเตอร์แบบสามแกนควบคู่และโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงขั้นสูง และวิธีการเตรียมตัวอย่างที่เกี่ยวข้อง ได้นำ LC/MS/MS มาสู่แนวหน้าของวิธีการวิเคราะห์สมัยใหม่สำหรับการวิจัยทางคลินิก

สาขาหลักของการใช้ HPLC/MS/MS ในเวชศาสตร์คลินิก:
• การได้รับรายละเอียดที่สมบูรณ์ของการเผาผลาญของสเตียรอยด์ (แผงสเตียรอยด์) พิวรีนและไพริมิดีนและสารประกอบอื่น ๆ
  การตรวจคัดกรองทารกแรกเกิดเพื่อหาข้อผิดพลาดในการเผาผลาญ แต่กำเนิด (การตรวจจับโรคหลายสิบโรคในการวิเคราะห์ครั้งเดียว);
• การตรวจติดตามการรักษาของยา - ยากดภูมิคุ้มกัน ยากันชัก ยาต้านไวรัส ยาต้านการแข็งตัวของเลือด และอื่นๆ - โดยไม่คำนึงถึงความพร้อมของชุดอุปกรณ์ของผู้ผลิต ไม่จำเป็นต้องซื้อชุดอุปกรณ์ราคาแพงสำหรับสารแต่ละชนิด คุณสามารถพัฒนาวิธีการของคุณเองได้
• พิษวิทยาคลินิก - วิเคราะห์สารประกอบยาเสพติดมากกว่า 500 ชนิดและสารเมตาโบไลต์ในการวิเคราะห์ครั้งเดียว โดยไม่มีการวิเคราะห์ยืนยัน
  โปรตีโอมิกส์และเมตาบอลิซึม

นอกจากนี้ HPLC-MSMS ยังใช้ในการตรวจหาโอลิโกแซ็กคาไรด์ในปัสสาวะ ซัลฟาไทด์ กรดไขมันสายยาว กรดน้ำดีสายยาว กรดเมทิลมาโลนิก ในการศึกษาพอร์ไฟเรียส คัดกรองผู้ป่วยที่มีความผิดปกติของการเผาผลาญ purine และไพริมิดีน

ตัวอย่างการประยุกต์ใช้โครมาโตกราฟีของเหลว
ร่วมกับ tandem mass spectrometry ในการตรวจทางคลินิก

การตรวจคัดกรองทารกแรกเกิด:ตัวอย่างแรกของการใช้ HPLC-MS/MS จำนวนมากในการวินิจฉัยทางคลินิกคือการตรวจคัดกรองข้อผิดพลาดทางเมตาบอลิซึมที่มีมาแต่กำเนิดในทารกแรกเกิด ปัจจุบันเป็นกิจวัตรในประเทศที่พัฒนาแล้วและครอบคลุมโรคต่างๆ มากกว่า 30 โรค รวมถึงโรคอะซีเมีย โรคกรดอะมิโน ความผิดปกติของกรดไขมันจากปฏิกิริยาออกซิเดชัน สิ่งที่ควรทราบเป็นพิเศษคือการวิจัยเกี่ยวกับความพิการแต่กำเนิด ซึ่งอาจนำไปสู่ปัญหาร้ายแรงหากไม่ได้รับการแก้ไขในทันที (เช่น หัวใจหรือตับโต หรือสมองบวมน้ำ) ข้อดีของการใช้ HPLC-MS/MS สำหรับการตรวจคัดกรองทารกแรกเกิดคือความสามารถในการวิเคราะห์กรดอะมิโนและอะซิลคาร์นิทีนทั้งหมดพร้อมกันด้วยวิธีการที่รวดเร็ว ราคาไม่แพง และมีความเฉพาะเจาะจงสูง

การตรวจสอบยารักษาโรค:การพัฒนาและการแนะนำของ immunosuppressant sirolimus (rapamycin) เพื่อป้องกันการปฏิเสธอวัยวะหลังการปลูกถ่ายเป็นหนึ่งในตัวขับเคลื่อนหลักสำหรับการแนะนำ HPLC-MS/MS ในห้องปฏิบัติการทางคลินิก วิธี HPLC-MS/MS ที่ทันสมัยช่วยให้สามารถตรวจวัด Tacrolimus, sirolimus, cyclosporine, everolimus และ mycofenoic acid ได้พร้อมกัน

HPLC-MS/MS ยังใช้สำหรับการวิเคราะห์พิษต่อเซลล์, ยาต้านไวรัส, ยาซึมเศร้าแบบไตรไซคลิก, ยากันชักและยาอื่นๆ ที่ต้องใช้ขนาดยาเป็นรายบุคคล

วิธี HPLC-MSMS ทำให้สามารถแยกและหาปริมาณ R- และ S-enantiomers ของวาร์ฟารินในช่วงความเข้มข้น 0.1-500 ng/ml

ยาและยาแก้ปวด: HPLC-MS/MS ถูกใช้อย่างกว้างขวางสำหรับการวิเคราะห์สารประกอบเหล่านี้เนื่องจากความง่ายในการเตรียมตัวอย่างและการวิเคราะห์ที่สั้น ปัจจุบันวิธีการนี้ใช้ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกเพื่อตรวจหายาหลายชนิด ความจำเพาะและความไวเฉพาะของวิธีการทำให้สามารถวิเคราะห์สารประกอบมากกว่า 500 ชนิดในคลาสต่างๆ พร้อมกันในตัวอย่างเดียวโดยมีการเตรียมตัวอย่างน้อยที่สุด ดังนั้นในกรณีของการวิเคราะห์ปัสสาวะ การเจือจางตัวอย่างอย่างง่าย 50-100 เท่าก็เพียงพอแล้ว เมื่อวิเคราะห์ผม แทนที่จะเป็นพวง 100-200 เส้น ผมเพียงเส้นเดียวก็เพียงพอแล้วที่จะระบุข้อเท็จจริงของการใช้ยาได้อย่างน่าเชื่อถือ

การวิเคราะห์ต่อมไร้ท่อและสเตียรอยด์: HPLC-MS/MS ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในห้องปฏิบัติการต่อมไร้ท่อหลายแห่งสำหรับการวิเคราะห์สเตียรอยด์ - เทสโทสเตอโรน คอร์ติซอล อัลเดสเตอโรน โปรเจสเตอโรน เอสทริออล และอื่นๆ อีกมากมาย

ห้องปฏิบัติการจำนวนมากขึ้นเรื่อยๆ เริ่มใช้ HPLC-MS/MS เพื่อตรวจสอบระดับวิตามิน D3 และ D2 ในเลือด

I. คำจำกัดความของสเตียรอยด์ (โปรไฟล์สเตียรอยด์)

ขณะนี้ห้องปฏิบัติการในโรงพยาบาลและคลินิกมีความสามารถในการพิจารณาสเตียรอยด์หลายชนิดพร้อมกันโดยใช้ HPLC/MS/MS ไม่จำเป็นต้องใช้ปริมาณตัวอย่างมาก ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งในการวิเคราะห์ตัวอย่างของเด็ก

กรณีที่แนะนำให้ทำการกำหนดสเตียรอยด์ (การทำโปรไฟล์) หลายตัว:
• แต่กำเนิด adrenal hyperplasia (CAH) เป็นข้อบกพร่องที่มีมา แต่กำเนิดในการสังเคราะห์สเตียรอยด์ นี่คือกลุ่มโรคทางพันธุกรรมที่เกิดจากกิจกรรมที่ไม่เหมาะสมของเอนไซม์เยื่อหุ้มสมองต่อมหมวกไตซึ่งนำไปสู่การลดลงของการผลิตคอร์ติซอล สำหรับการวินิจฉัย SAN ที่เชื่อถือได้ ขอแนะนำให้ตรวจหา cortisol, androstenedione และ 17-hydroxyprogesterone HPLC/MS/MS ช่วยให้สามารถหาปริมาณสเตียรอยด์ทั้งสามได้อย่างแม่นยำในการวิเคราะห์ครั้งเดียวด้วยความมั่นใจ 100%
• การตรวจคัดกรองทารกแรกเกิดเป็นประจำโดยใช้อิมมูโนแอสเสย์มีลักษณะเฉพาะด้วยอัตราที่สูงของผลลัพธ์ที่เป็นบวกและลบของเต้านม การกำหนด HPLC/MS/MS ของคอร์ติซอลไม่เพียงเท่านั้น แต่ยังรวมถึงอัลโดสเตอโรนและ 11-ดีออกซีคอร์ติซอลทำให้สามารถแยกแยะระหว่างความไม่เพียงพอของต่อมหมวกไตปฐมภูมิและทุติยภูมิได้
• HPLC/MS/MS ช่วยในการตรวจหาสเตียรอยด์ในต่อมลูกหมากอักเสบและกลุ่มอาการปวดกระดูกเชิงกรานเรื้อรัง
• HPLC-MS/MS ช่วยให้คุณระบุโปรไฟล์ของสเตียรอยด์และระบุสาเหตุของวัยแรกรุ่นของต่อมหมวกไตในเด็กเล็กได้ พบว่าความเข้มข้นของฮอร์โมนเทสโทสเตอโรน แอนโดรสเตนีไดโอน ดีไฮโดรเอเปียนโดรสเตอโรน (DHEA) และซัลเฟตในเด็กเหล่านี้สูงกว่าเด็กกลุ่มควบคุมเล็กน้อย
• เซรั่มจากผู้สูบบุหรี่ ผู้สูบบุหรี่ และผู้ไม่สูบบุหรี่ได้รับการวิเคราะห์เพื่อหาฮอร์โมนสเตียรอยด์และฮอร์โมนไทรอยด์ 15 ชนิด เพื่อตรวจสอบความสัมพันธ์ระหว่างผู้ป่วยที่สูบบุหรี่และความเข้มข้นของฮอร์โมน
• HPLC/MS/MS ใช้ในการจัดทำโปรไฟล์ของฮอร์โมนหญิงสเตียรอยด์บางชนิดในปัสสาวะ
• เมื่อใช้ HPLC/MS/MS ความเข้มข้นของฮอร์โมนที่ออกฤทธิ์ต่อระบบประสาทได้รับการประเมินเพื่อป้องกันไม่ให้เกิดภาวะเส้นประสาทอักเสบจากเบาหวาน

ครั้งที่สอง การกำหนดฮอร์โมนไทรอยด์

วิธีการประจำในการพิจารณาฮอร์โมนไทรอยด์มักจะใช้ radioimmunoassay ซึ่งมีราคาแพงและตรวจพบเฉพาะ T3 และ T4 เท่านั้น ซึ่งสามารถจำกัดความสามารถในการตรวจสอบและควบคุมการทำงานของต่อมไทรอยด์ได้อย่างเต็มที่

• ในปัจจุบัน โดยใช้ HPLC-MSMS การวิเคราะห์ไทรอยด์ฮอร์โมนห้าชนิดพร้อมกันในตัวอย่างซีรัมในเลือด ซึ่งรวมถึงไทรอกซีน (T4), 3,3',5-ไตรไอโอโดไทโรนีน (T3), 3,3',5'- (rT3), 3 , 3'-diiodothyronine (3,3'-T2) และ 3,5-diiodothyronine (3,5-T2) ในช่วงความเข้มข้น 1-500 ng/ml
• วิธี HPLC/MS/MS ยังใช้ในการวิเคราะห์องค์ประกอบของฮอร์โมนในผู้ป่วยที่ได้รับการผ่าตัดต่อมไทรอยด์ ระดับของ thyroxine (T4), triiodothyronine (T3), T4 ฟรีและฮอร์โมนกระตุ้นต่อมไทรอยด์ (TSH) หลังการผ่าตัดจะถูกกำหนด พบว่า HPLC/MS/MS เป็นวิธีที่ยอดเยี่ยมในการสร้างความสัมพันธ์ระหว่าง TSH กับความเข้มข้นของฮอร์โมนไทรอยด์
• วิธีการ HPLC/MS/MS ถูกใช้เพื่อกำหนดหาไทรอกซิน (T4) ในน้ำลายและซีรัมในเลือดของมนุษย์ วิธีการนี้มีลักษณะเฉพาะด้วยความสามารถในการทำซ้ำ ความแม่นยำ และขีดจำกัดการตรวจจับที่ 25 pg/ml การศึกษาพบว่ามีความสัมพันธ์ในการวินิจฉัยในระดับความเข้มข้น T4 ของน้ำลายระหว่างอาสาสมัครยูไทรอยด์กับผู้ป่วยโรคเกรฟส์

ปัจจุบันวิธี HPLC/MS/MS มีความไว ความจำเพาะ และความแม่นยำที่จำเป็นในการตรวจหาสเตียรอยด์ทั้งหมดในของเหลวชีวภาพได้อย่างน่าเชื่อถือ และเพิ่มความสามารถในการวินิจฉัย โดยเฉพาะอย่างยิ่งในกรณีของอาร์เรย์สเตียรอยด์

สาม. การหาค่า 25-ไฮดรอกซีวิตามินดีโดย HPLC/MS/MS

25-ไฮดรอกซีวิตามินดี (25OD) เป็นรูปแบบหมุนเวียนที่สำคัญของวิตามินดีและเป็นสารตั้งต้นของรูปแบบออกฤทธิ์ (1,25-ไดออกซีวิตามินดี) เนื่องจากครึ่งชีวิตที่ยาวนาน การกำหนด 25OD จึงมีความสำคัญต่อการพิจารณาสถานะของวิตามินดีในร่างกายของผู้ป่วย วิตามินดีมีอยู่สองรูปแบบ: วิตามินดี3 (cholecalciferol) และวิตามินดี2 (ergocalciferol) ทั้งสองรูปแบบถูกเผาผลาญเป็นรูปแบบ 25OD ตามลำดับ สิ่งที่สำคัญอย่างยิ่งสำหรับการวินิจฉัยคือความพร้อมใช้งานของวิธีการวิเคราะห์ที่สามารถระบุวิตามินทั้งสองรูปแบบได้อย่างแม่นยำและช่วยให้สามารถติดตามผู้ป่วยที่มีความผิดปกติของวิตามินดีได้ วิธีการที่ใช้จนถึงขณะนี้ไม่อนุญาตให้มีการกำหนดวิตามิน D2 และ D3 แยกจากกัน นอกจากนี้ ที่วิตามิน D2 ที่มีความเข้มข้นสูง ปริมาณ D3 ที่ตรวจพบได้จะถูกประเมินต่ำไป ข้อเสียอีกประการหนึ่งคือการใช้ไอโซโทปกัมมันตภาพรังสี การใช้วิธี HPLC/MS/MS ทำให้ไม่เพียงแค่หลีกเลี่ยงการใช้ไอโซโทปกัมมันตภาพรังสีเท่านั้น แต่ยังสามารถตรวจสอบรูปแบบออกฤทธิ์ของวิตามินทั้งสองแบบแยกกันได้

วิธีนี้ใช้ได้กับผู้ป่วยต่อไปนี้:
1. หากคุณสงสัยว่ามีวิตามินดีในร่างกายต่ำ
2. หากสงสัยว่าเป็นพิษโดยไม่ทราบสาเหตุ
3. เมื่อตรวจผู้ป่วยที่รับการรักษาวิตามินดีในปริมาณต่ำ
4. การใช้ HPLC/MS/MS อนุญาตให้กำหนดทั้งสองรูปแบบแยกกันระหว่างการตรวจติดตามผู้ป่วย

IV. การตรวจหาสารกดภูมิคุ้มกันโดย HPLC/MS/MS

หลังการปลูกถ่ายอวัยวะ ต้องใช้ยากดภูมิคุ้มกันตลอดชีวิตเพื่อหลีกเลี่ยงการปฏิเสธ ด้วยหน้าต่างการรักษาที่แคบมากและมีความเป็นพิษสูง ยากดภูมิคุ้มกันจึงจำเป็นต้องได้รับยาแต่ละขนาดเพื่อให้ได้ผลสูงสุด ดังนั้นจึงเป็นเรื่องสำคัญที่จะต้องตรวจสอบยากดภูมิคุ้มกันหลัก: ไซโคลสปอริน เอ, ทาโครลิมัส, ซิโรลิมัส และเอเวอร์โรลิมัส เพื่อปรับขนาดยาสำหรับผู้ป่วยแต่ละราย ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของยาในเลือด

อิมมูโนแอสเซย์ยังคงใช้เพื่อตรวจสอบยาเหล่านี้ แต่วิธีการเหล่านี้มีราคาแพงและมีความเฉพาะเจาะจง ความแม่นยำ และความสามารถในการทำซ้ำได้จำกัด ผู้ป่วยเสียชีวิตจากการให้ยากดภูมิคุ้มกันอย่างไม่เหมาะสมโดยพิจารณาจากผลลัพธ์ที่ได้จากวิธีการทางภูมิคุ้มกัน ปัจจุบัน การทดสอบภูมิคุ้มกันถูกแทนที่ในห้องปฏิบัติการทางคลินิกโดย HPLC/MS/MS ตัวอย่างเช่น ที่คลินิกของมหาวิทยาลัยมิวนิก มีการวิเคราะห์ตัวอย่างประมาณ 70 ตัวอย่างทุกวันสำหรับเนื้อหาของไซโรลิมัสและไซโคลสปอริน A โดยใช้ระบบ HPLC/MS/MS การเตรียมตัวอย่างและการควบคุมเครื่องมือทั้งหมดดำเนินการโดยคนคนเดียว ห้องปฏิบัติการยังเปลี่ยนไปใช้การวิเคราะห์ทาโครลิมัสด้วยวิธีนี้อีกด้วย

• มีการอธิบายการใช้ HPLC/MS/MS สำหรับการตรวจทาโครลิมัส, ไซโรลิมัส, แอสโคมัยซิน, ดีเมทอกซีซิโรลิมัส, ไซโคลสปอริน A และไซโคลสปอริน G ในเลือดพร้อมกัน ช่วงที่กำหนดโดยความเข้มข้นคือ 1.0 - 80.0 ng / ml สำหรับ cyclosporine 25 - 2000 ng / ml. มีการวิเคราะห์ตัวอย่างมากกว่า 50,000 ตัวอย่างในห้องปฏิบัติการในระหว่างปี
• เนื่องจากพบว่าการใช้ทาโครลิมัสและซิโรลิมัสพร้อมกันให้ผลการรักษาในทางบวก จึงมีการพัฒนาวิธี HPLC/MS/MS ที่ง่ายและมีประสิทธิภาพเพื่อกำหนดแยกกันในเลือดสำหรับการตรวจวิเคราะห์ทางคลินิก การวิเคราะห์ตัวอย่างหนึ่งตัวอย่างใช้เวลา 2.5 นาทีโดยมีความแม่นยำ 2.46% - 7.04% สำหรับ Tacrolimus และ 5.22% - 8.30% สำหรับ Sirolimus สำหรับกราฟการวิเคราะห์ทั้งหมด ขีด จำกัด ล่างของการตรวจหา tacrolimus คือ 0.52 ng / ml, sirolimus คือ 0.47 ng / ml

V. การหา homocysteine ​​​​โดย HPLC/MS/MS

Homocysteine ​​​​สนใจโรคหัวใจและหลอดเลือด (ลิ่มเลือดอุดตัน, โรคหัวใจ, หลอดเลือด) และสภาวะทางคลินิกอื่น ๆ (ภาวะซึมเศร้า, โรคอัลไซเมอร์, โรคกระดูกพรุน, ภาวะแทรกซ้อนในการตั้งครรภ์ ฯลฯ ) วิธีที่มีอยู่สำหรับการวิเคราะห์โฮโมซิสเทอีน รวมถึงอิมมูโนแอสเซย์นั้นมีราคาแพง วิธี HPLC/MS/MS ที่รวดเร็วสำหรับการวิเคราะห์ homocysteine ​​​​ได้รับการพัฒนาเพื่อใช้ทางคลินิกเป็นประจำในการวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนมาก อิออไนเซชันดำเนินการโดยวิธีอิเล็กโตรสเปรย์ วิธีการนี้สามารถทำซ้ำได้ มีความเฉพาะเจาะจงสูง และแม่นยำ ข้อดีของวิธีนี้คือค่ารีเอเจนต์ต้นทุนต่ำและการเตรียมตัวอย่างที่เรียบง่าย สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างได้ 500 ตัวอย่างขึ้นไปต่อวัน

บทสรุป

ควรสังเกตว่าถึงแม้จะใช้วิธีการอิมมูโนแอสเซย์ที่ได้รับการปรับปรุงอย่างมีนัยสำคัญในปัจจุบัน เนื่องจากข้อจำกัดพื้นฐานทางเทคนิค วิธีนี้จะไม่มีความแม่นยำและความจำเพาะเทียบเท่ากับสารเป้าหมายเมื่อเปรียบเทียบกับ HPLC-MSMS โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่อมีสารเมตาโบไลต์ สิ่งนี้ไม่เพียงนำไปสู่ความแม่นยำต่ำของวิธี ELISA และเปอร์เซ็นต์ของผลลัพธ์ที่เป็นเท็จบวกและลบเท็จ แต่ยังไม่อนุญาตให้เปรียบเทียบผลลัพธ์ที่ได้รับในแผนกทางคลินิกต่างๆ โดยใช้วิธี ELISA การใช้ HPLC-MS/MS ขจัดข้อด้อยนี้ ทำให้สามารถวิเคราะห์ตัวอย่างจำนวนมากที่มีความเฉพาะเจาะจงสูง แม่นยำ และรวดเร็ว โดยมีความน่าเชื่อถือสูงเมื่อมีสารเมตาโบไลต์และไม่มีการรบกวนจากสารร่วมและสารภายนอกในพลาสมาและเลือดของ ผู้ป่วย.

แม้จะมีค่าใช้จ่ายสูงอย่างเห็นได้ชัดของเครื่องมือที่ซับซ้อนตามที่การปฏิบัติของโลกแสดงให้เห็นว่ามีการดำเนินการที่เหมาะสม แต่คอมเพล็กซ์นี้จะจ่ายออกใน 1-2 ปี สาเหตุหลักมาจากการวิเคราะห์ครั้งเดียวที่มีต้นทุนต่ำ เนื่องจากการวิเคราะห์สารประกอบหลายสิบและหลายร้อยชนิดพร้อมกัน และไม่จำเป็นต้องซื้อชุดตรวจวินิจฉัยที่มีราคาแพง นอกจากนี้ ห้องปฏิบัติการยังมีโอกาสพัฒนาวิธีการวิเคราะห์ที่จำเป็นอย่างอิสระและไม่ขึ้นอยู่กับผู้ผลิตชุดอุปกรณ์

การเลือกการกำหนดค่าเครื่องมือวัดที่ถูกต้อง

มีวิธีการมากมายที่แตกต่างกันของแมสสเปกโตรเมตรีและประเภทของแมสสเปกโตรมิเตอร์ที่ออกแบบมาเพื่อแก้ปัญหาที่หลากหลาย ตั้งแต่การระบุโครงสร้างของโมเลกุลโปรตีนที่ซับซ้อนซึ่งมีน้ำหนักหลายแสนตัน ไปจนถึงการวิเคราะห์เชิงปริมาณปริมาณมากเป็นประจำของโมเลกุลขนาดเล็ก

เพื่อแก้ปัญหาให้สำเร็จ หนึ่งในเงื่อนไขหลักคือการเลือกประเภทอุปกรณ์ที่เหมาะสม ไม่มีเครื่องมือสากลที่สามารถแก้ปัญหาการวิเคราะห์ทั้งหมดได้ ดังนั้นอุปกรณ์ที่ออกแบบมาเพื่อแก้ปัญหาการระบุจุลินทรีย์จึงไม่สามารถทำการวิเคราะห์เชิงปริมาณของโมเลกุลขนาดเล็กได้ และในทางกลับกัน. ความจริงก็คือ แม้จะมีชื่อสามัญ อุปกรณ์เหล่านี้เป็นอุปกรณ์ที่แตกต่างกันโดยสิ้นเชิงที่ทำงานบนหลักการทางกายภาพที่แตกต่างกัน ในกรณีแรก นี่คือแมสสเปกโตรมิเตอร์ตามเวลาของเที่ยวบินที่มีแหล่งกำเนิดไอออนไนซ์ด้วยเลเซอร์ - MALDI-TOF และในกรณีที่สอง - ควอดรูโพลสามตัวที่มีอิเล็กโตรสเปรย์ไอออไนซ์ - HPLC-MSMS

พารามิเตอร์ที่สำคัญที่สุดอันดับสองคือการเลือกการกำหนดค่าระบบที่ถูกต้อง มีผู้ผลิตอุปกรณ์แมสสเปกโตรเมทรีรายใหญ่หลายราย อุปกรณ์ของผู้ผลิตแต่ละรายไม่เพียงแต่มีจุดแข็งเท่านั้น แต่ยังมีจุดอ่อนที่พวกเขามักจะไม่พูดถึง ผู้ผลิตแต่ละรายผลิตอุปกรณ์ของตนเอง ค่าใช้จ่ายของคอมเพล็กซ์การวิเคราะห์หนึ่งรายการอยู่ในช่วง $100,000 ถึง $1,000,000 หรือมากกว่า การเลือกผู้ผลิตที่ดีที่สุดและการกำหนดค่าอุปกรณ์ที่เหมาะสมจะไม่เพียงช่วยประหยัดทรัพยากรทางการเงินที่สำคัญ แต่ยังช่วยแก้ปัญหาได้อย่างมีประสิทธิภาพอีกด้วย น่าเสียดาย มีตัวอย่างมากมายที่ใช้อุปกรณ์ของห้องปฏิบัติการโดยไม่คำนึงถึงปัจจัยเหล่านี้ ผลที่ได้คืออุปกรณ์ที่ไม่ได้ใช้งานเสียเงิน

ปัจจัยที่สามที่กำหนดการดำเนินงานที่ประสบความสำเร็จของห้องปฏิบัติการคือเจ้าหน้าที่ แมสสเปกโตรมิเตอร์ต้องการบุคลากรที่มีคุณสมบัติสูง น่าเสียดายที่ไม่มีมหาวิทยาลัยใดในรัสเซียที่มีหลักสูตรเกี่ยวกับแมสสเปกโตรเมตรีที่ใช้งานได้จริง โดยเฉพาะอย่างยิ่งในส่วนที่เกี่ยวข้องกับการใช้งานทางคลินิก และงานฝึกอบรมเจ้าหน้าที่ของห้องปฏิบัติการแต่ละแห่งจะต้องได้รับการแก้ไขด้วยตนเอง โดยปกติ การฝึกอบรมการทำความคุ้นเคย 2-3 วันโดยผู้ผลิตหลังจากเปิดตัวอุปกรณ์นั้นไม่เพียงพออย่างแน่นอนที่จะเข้าใจพื้นฐานของวิธีการและรับทักษะในการทำงานกับอุปกรณ์

ปัจจัยที่สี่คือการขาดวิธีการวิเคราะห์แบบสำเร็จรูป ห้องปฏิบัติการแต่ละแห่งมีภารกิจที่มีความสำคัญเป็นของตัวเอง สำหรับการแก้ปัญหานั้นจำเป็นต้องพัฒนาวิธีการของตนเอง สามารถทำได้โดยผู้ที่มีประสบการณ์การทำงานบนอุปกรณ์อย่างน้อย 2-3 ปี ผู้ผลิตบางครั้งจัดหาวิธีการทั่วไปหนึ่งหรือสองวิธีในลักษณะที่แนะนำ แต่อย่าปรับให้เข้ากับงานในห้องปฏิบัติการเฉพาะ

ที่ BioPharmExpert LLCผู้เชี่ยวชาญที่มีประสบการณ์หลายปีในการทำงานเกี่ยวกับแมสสเปกโตรมิเตอร์ประเภทต่างๆ ตลอดจนการพัฒนาวิธีการและการกำหนดสูตรการวิเคราะห์ที่มีประสิทธิภาพสูง ทำงานที่นี่ ดังนั้นเราจึงให้บริการดังต่อไปนี้:

1. การเลือกการกำหนดค่าเครื่องมือที่เหมาะสมที่สุดสำหรับงานเฉพาะของลูกค้า
2. ซื้อ จัดส่ง และเปิดตัวอุปกรณ์จากผู้ผลิตชั้นนำด้านแมสสเปกโตรมิเตอร์แบบควบคู่ การฝึกอบรมบุคลากรทีละขั้นตอนภายในหนึ่งปีนับจากวันที่เปิดตัวอุปกรณ์
3. ชุดของวิธีการและฐานข้อมูลสำเร็จรูปสำหรับการแก้ปัญหาทางคลินิกขั้นพื้นฐาน
4. การพัฒนาวิธีการวิเคราะห์และการแก้ปัญหาเฉพาะงานของลูกค้าในห้องปฏิบัติการโดยมีส่วนร่วมของพนักงาน
5. การสนับสนุนระเบียบวิธีในทุกขั้นตอนของการทำงาน

คีย์เวิร์ด

เตียรอยด์ / ไขมัน / เซรั่มเลือด / โปรไฟล์เมตาบอลิ / ขยะอุตสาหกรรม/ สเตียรอยด์ / ไขมัน / เซรั่มเลือด / โปรไฟล์เมตาบอลิซึม / ของเสียจากอุตสาหกรรม

คำอธิบายประกอบ บทความทางวิทยาศาสตร์เกี่ยวกับสัตวแพทยศาสตร์ผู้เขียนงานทางวิทยาศาสตร์ - Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, Yantsevich Alexey Viktorovich, Dmitrochenko Alesya Egorovna, Ivanchik Alexander Viktorovich

ผลกระทบของปัจจัยมานุษยวิทยามีผลกระทบหลายแง่มุมต่อร่างกายมนุษย์และสัตว์ ในการเชื่อมต่อกับผลกระทบที่ซับซ้อน การระบุผลกระทบด้านลบของแต่ละปัจจัยเป็นงานที่ค่อนข้างยาก ระเบียบวิธีเมตาบอลิซึมซึ่งทำให้สามารถเอาชนะปัญหาเหล่านี้ได้ ถูกนำไปใช้ในการประเมินธรรมชาติและขอบเขตของผลกระทบของของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตชต่อไขมันในสัตว์ทดลองในระหว่างการเพาะเมล็ดในจมูกด้วยของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตช และการบริโภคน้ำดื่มที่ได้จากแหล่งที่ตั้งอยู่ในเขตพื้นที่ที่มีศักยภาพในการผลิตโปแตช การแยกไขมันออกจากซีรัมได้ดำเนินการโดยใช้เทคนิคที่พัฒนาขึ้นเป็นพิเศษโดยอาศัยการสกัดด้วยเฟสของแข็ง ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดคอเลสเตอรอลออกจากตัวอย่างได้ แต่ละตัวอย่างถูกวิเคราะห์โดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงด้วยการตรวจจับแมสสเปกโตรเมทริก (HPLC-MS) หลังจากนั้นโครมาโตแกรมที่เป็นผลลัพธ์ถูกประมวลผลโดยใช้วิธีการของส่วนประกอบหลัก (PCA) และการวิเคราะห์คลัสเตอร์ เทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้ทำให้สามารถแยกสารที่ไม่ชอบน้ำออกจากซีรัมในเลือดได้อย่างมีประสิทธิภาพ โปรไฟล์ไขมันของซีรัมในเลือดของสัตว์ทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื้อหาของฟอสโฟลิปิดและออกซีสเตียรอยด์ และพบความแตกต่างในกระบวนการเมตาบอลิซึมระหว่างสัตว์ทดลองและสัตว์ควบคุม ในเลือดของสัตว์ทดลอง ความเข้มข้นของ oxysteroids เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม

หัวข้อที่เกี่ยวข้อง เอกสารทางวิทยาศาสตร์ในสัตวแพทยศาสตร์ผู้เขียนงานทางวิทยาศาสตร์ - Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, Yantsevich Alexey Viktorovich, Dmitrochenko Alesya Egorovna, Ivanchik Alexander Viktorovich

• การตอบสนองของออร์แกเนลล์ของเซลล์ตับของหนูต่อผลกระทบของสนามแม่เหล็กที่ปรับแอมพลิจูดของความถี่อุตสาหกรรม

  2014 / Belkin Anatoly Dmitrievich, Michurina Svetlana Viktorovna

• การระบุปริมาณการเตรียมฮอร์โมนในเนื้อดิบ การวิเคราะห์ ß-agonists

  2016 / Kulikovsky A.V. , Kuznetsova O.A. , Ivankin A.N.

• การใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงในการตรวจวัดยูบิควิโนนในสิ่งมีชีวิตในน้ำ

  2003 / Rybin V. G.

• การหาค่า N7--เอทิล]-กวานีนในปัสสาวะของหนูเป็นเครื่องหมายของการสัมผัสกับมัสตาร์ดกำมะถัน

  2017 / Orlova Olga Igorevna, Karakashev Georgy Vasilyevich, Shmurak Vladimir Igorevich, Abzianidze Victoria Vladimirovna, Savelyeva Elena Igorevna

• การพัฒนาวิธี HPLC-MS สำหรับการวิเคราะห์กรด ursodeoxycholic ในโหมดการตรวจจับไอออนที่มีประจุบวก

  2013 / Ilya Aleksandrovich Krasnov, D. E. Bobkov, M. Zaitseva, S. S. Prisyach, N. V. Krasnov

• การพัฒนาเทคโนโลยีสำหรับการสร้างระบบทดสอบยุคใหม่โดยใช้ thrombodefensins สำหรับการวินิจฉัยโรคติดเชื้อและการอักเสบแบบเร่งด่วน

  2015 / Ivanov Yury Borisovich, Vasilchenko Alexey Sergeevich

• ขั้นตอนสำหรับการตรวจวัดคาร์บามาเซพีนและคาร์บามาเซพีน-10,11-อีพ็อกไซด์พร้อมกันโดย HPLC-MS/MS

  2015 / Rodina T.A. , Melnikov E.S. , Sokolov A.V. , Prokofiev A.B. , Arkhipov V.V. , Adamov G.V. , Pozdnyakov D.L. , Olefir Yu.V.

• องค์ประกอบของกรดไขมันและสเตียรอยด์ของน้ำมันพืช

  2549 / Khasanov V. V. , Ryzhova G. L. , Dychko K. A. , Kuryaeva T. T.

• การพัฒนาและการตรวจสอบความถูกต้องของวิธีการกำหนดจิดาเซแพมในวัสดุชีวภาพโดยโครมาโตมัสสเปกโตรเมทรี

  2015 / ก.พ. Chubenko มหาบัณฑิต ซาฟเชนโก

• การหาค่าไซโคลสปอรินเอในเลือดซีรั่มเพื่อติดตามยารักษาโรค

  2008 / Fedorova G. A. , Podolskaya E. P. , Novikov A. V. , Lyutvinsky Ya. I. , Krasnov N. V.

การวิเคราะห์โปรไฟล์ของเซรั่มไขมันในหนูตะเภาเพื่อตรวจหาการเปลี่ยนแปลงในเมตาบอลิซึมในระยะแรกเมื่อสัมผัสกับสิ่งปลอมปนในสิ่งแวดล้อม

การสัมผัสกับปัจจัยมานุษยวิทยามีผลกระทบหลายแง่มุมต่อร่างกายของมนุษย์และสัตว์ เนื่องจากอิทธิพลที่ซับซ้อน การตรวจหาผลกระทบด้านลบของปัจจัยบางอย่างจึงเป็นงานที่ค่อนข้างซับซ้อน ระเบียบวิธีเมตาบอลิซึมที่เอาชนะปัญหาเหล่านี้ได้ถูกนำมาใช้ในการประเมินลักษณะและระดับของผลกระทบของของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตชต่อโปรไฟล์ไขมันของสัตว์ทดลองหลังการฉีดวัคซีนในช่องปากด้วยของเสียจากการผลิตปุ๋ยโพแทสเซียมและการบริโภคน้ำดื่มที่ได้รับจากแหล่ง ตั้งอยู่ในเขตของการกระทำที่อาจเกิดขึ้นของการผลิตปุ๋ยโปแตสซิก การแยกไขมันออกจากซีรัมทำได้โดยใช้เทคนิคที่พัฒนาขึ้นเป็นพิเศษโดยอาศัยการสกัดตัวอย่างในเฟสของแข็ง ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดคอเลสเตอรอลออกจากตัวอย่างได้ ตัวอย่างแต่ละตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์ด้วย HPLC-MS หลังจากนั้นโครมาโตแกรมที่ได้มาถูกบำบัดด้วยการใช้วิธีการวิเคราะห์องค์ประกอบหลักและการวิเคราะห์แบบคลัสเตอร์ เทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้ช่วยให้สามารถแยกสารที่ไม่ชอบน้ำในซีรัมในเลือดได้อย่างมีประสิทธิภาพ มีการกำหนดระดับไขมันในเลือดของสัตว์ทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื้อหาของฟอสโฟลิปิดและออกซีสเตอรอยด์ และพบว่ามีความแตกต่างในกระบวนการเมแทบอลิซึมของสัตว์ทดลองและกลุ่มควบคุม แสดงให้เห็นว่าในซีรัมของสัตว์ทดลองพบว่ามีความเข้มข้นของไฮดรอกซีสเตียรอยด์เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม

ข้อความของงานวิทยาศาสตร์ ในหัวข้อ "วิธี WLC-MS สำหรับการวิเคราะห์โปรไฟล์ไขมันของซีรั่มเลือดของหนูตะเภาเพื่อตรวจหาการเปลี่ยนแปลงในระยะเริ่มต้นของการเผาผลาญเมื่อสัมผัสกับมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อม"

[ไฮยีน่าและสุขาภิบาล 3/2557

Chakhovskiy P.A.1, Yantsevich A.V.2, Dmitrochenko A.E.2, Ivanchik A.V.2

HPLC-MS-METHOD สำหรับการวิเคราะห์โปรไฟล์ไขมันในเลือด

หนูตะเภาเพื่อตรวจจับการเปลี่ยนแปลงเมตาบอลิซึมในระยะเริ่มต้นเมื่อสัมผัสกับมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อม

TU "ศูนย์วิทยาศาสตร์และการปฏิบัติของสาธารณรัฐเพื่อสุขอนามัย", 220012, มินสค์, สาธารณรัฐเบลารุส; ^Institute of Bioorganic Chemistry of the National Academy of Sciences of Belarus, 220114, Minsk, สาธารณรัฐเบลารุส

ผลกระทบของปัจจัยมานุษยวิทยามีผลกระทบหลายแง่มุมต่อร่างกายมนุษย์และสัตว์ ในการเชื่อมต่อกับผลกระทบที่ซับซ้อน การระบุผลกระทบด้านลบของแต่ละปัจจัยเป็นงานที่ค่อนข้างยาก ระเบียบวิธีเมตาบอลิซึมซึ่งทำให้สามารถเอาชนะปัญหาเหล่านี้ได้ ถูกนำไปใช้ในการประเมินธรรมชาติและขอบเขตของผลกระทบของของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตชต่อไขมันในสัตว์ทดลองในระหว่างการเพาะเมล็ดในจมูกด้วยของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตช และการบริโภคน้ำดื่มที่ได้จากแหล่งที่ตั้งอยู่ในเขตพื้นที่ที่มีศักยภาพในการผลิตโปแตช การแยกไขมันออกจากซีรัมได้ดำเนินการโดยใช้เทคนิคที่พัฒนาขึ้นเป็นพิเศษโดยอาศัยการสกัดด้วยเฟสของแข็ง ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดคอเลสเตอรอลออกจากตัวอย่างได้ แต่ละตัวอย่างถูกวิเคราะห์โดยโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงด้วยการตรวจจับแมสสเปกโตรเมทริก (HPLC-MS) หลังจากนั้นโครมาโตแกรมที่เป็นผลลัพธ์ถูกประมวลผลโดยใช้วิธีการของส่วนประกอบหลัก (PCA) และการวิเคราะห์คลัสเตอร์ เทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้ทำให้สามารถแยกสารที่ไม่ชอบน้ำออกจากซีรัมในเลือดได้อย่างมีประสิทธิภาพ โปรไฟล์ไขมันของซีรัมในเลือดของสัตว์ทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื้อหาของฟอสโฟลิปิดและออกซีสเตียรอยด์ และพบความแตกต่างในกระบวนการเมตาบอลิซึมระหว่างสัตว์ทดลองและสัตว์ควบคุม ในเลือดของสัตว์ทดลอง ความเข้มข้นของ oxysteroids เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม

คำสำคัญ: สเตียรอยด์; ไขมัน; ซีรั่มเลือด; รายละเอียดการเผาผลาญ ของเสียจากอุตสาหกรรม

P. A. Chakhovskiy1, A.V Yantsevich2, A. E. Dmitrochenko2, A. V. Ivanchik2 - การวิเคราะห์โปรไฟล์ไขมันในเลือดของเซรั่มในหนูตะเภาเพื่อตรวจหาการเปลี่ยนแปลงในเมตาบอลิซึมในระยะแรกภายใต้การสัมผัสกับสารปนเปื้อนสิ่งแวดล้อม

1ศูนย์สุขอนามัยและการปฏิบัติของพรรครีพับลิกัน มินสค์ สาธารณรัฐเบลารุส 220012; 2สถาบันชีวเคมี, มินสค์, สาธารณรัฐเบลารุส, 22041

สำหรับการติดต่อ: Chakhovskiy Pavel Anatolyevich, [ป้องกันอีเมล]. คอม

การสัมผัสกับปัจจัยมานุษยวิทยามีผลกระทบหลายแง่มุมต่อร่างกายของมนุษย์และสัตว์ เนื่องจากอิทธิพลที่ซับซ้อน การตรวจหาผลกระทบด้านลบของปัจจัยบางอย่างจึงเป็นงานที่ค่อนข้างซับซ้อน ระเบียบวิธีเมตาบอลิซึมที่เอาชนะปัญหาเหล่านี้ได้ถูกนำมาใช้ในการประเมินลักษณะและระดับของผลกระทบของของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตชต่อโปรไฟล์ไขมันของสัตว์ทดลองหลังการฉีดวัคซีนในช่องปากด้วยของเสียจากการผลิตปุ๋ยโพแทสเซียมและการบริโภคน้ำดื่มที่ได้รับจากแหล่งที่อยู่ ในเขตศักยภาพการผลิตปุ๋ยโพแทสเซียม การแยกไขมันออกจากซีรัมทำได้โดยใช้เทคนิคที่พัฒนาขึ้นเป็นพิเศษโดยอาศัยการสกัดตัวอย่างในเฟสของแข็ง ซึ่งช่วยให้สามารถกำจัดคอเลสเตอรอลออกจากตัวอย่างได้ ตัวอย่างแต่ละตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์ด้วย HPLC -MS หลังจากนั้นโครมาโตแกรมที่ได้มาถูกบำบัดด้วยการใช้วิธีการวิเคราะห์องค์ประกอบหลักและการวิเคราะห์แบบคลัสเตอร์ เทคนิคที่พัฒนาขึ้นนี้ช่วยให้สามารถแยกสารที่ไม่ชอบน้ำในซีรัมในเลือดได้อย่างมีประสิทธิภาพ มีการกำหนดระดับไขมันในเลือดของสัตว์ทดลอง โดยเฉพาะอย่างยิ่งเนื้อหาของฟอสโฟลิปิดและออกซีสเตอรอยด์ และพบว่ามีความแตกต่างในกระบวนการเมแทบอลิซึมของสัตว์ทดลองและกลุ่มควบคุม แสดงให้เห็นว่าในซีรัมของสัตว์ทดลองพบว่ามีความเข้มข้นของไฮดรอกซีสเตียรอยด์เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม

คำสำคัญ: สเตียรอยด์ ไขมัน เซรั่มในเลือด รายละเอียดการเผาผลาญ ของเสียจากอุตสาหกรรม

บทนำ

งานที่สำคัญที่สุดอย่างหนึ่งของชีววิทยาระบบและพันธุศาสตร์เชิงหน้าที่คือการรวมโปรตีโอมิกส์ การถอดรหัส และข้อมูลเกี่ยวกับกระบวนการเมตาบอลิซึมที่เกิดขึ้นในร่างกาย โรคหรือกระบวนการทางพยาธิวิทยาใด ๆ ที่เกิดขึ้นในร่างกายจะสะท้อนให้เห็นในเนื้อหาของสารที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำในเนื้อเยื่อและเลือด ในปีพ.ศ. 2514 ได้มีการแนะนำคำว่า "โปรไฟล์เมตาบอลิซึม" สำหรับการกำหนดลักษณะเฉพาะของเมแทบอไลต์ที่มีน้ำหนักโมเลกุลต่ำของพลาสมาในเลือด เนื่องจากการวิเคราะห์เมตาโบไลต์หลายคลาสพร้อมกันนั้นซับซ้อนอย่างยิ่งและไม่สมจริงในทางปฏิบัติ จึงมักใช้วิธีการต่างๆ เพื่อศึกษาโปรไฟล์เมตาบอลิซึม รวมถึงสเปกโตรสโคปีของคลื่นแม่เหล็กไฟฟ้านิวเคลียร์นิวเคลียร์ (NMR) และโครมาโต-แมสสเปกโตรเมทรี

ตามกฎแล้ว การศึกษาเมตาบอลิซึมจะจำกัดเฉพาะกลุ่มของสารบางกลุ่มที่แยกออกจากส่วนประกอบอื่นๆ ระหว่างการเตรียมตัวอย่าง ข้อมูลกลุ่มที่เป็นผลลัพธ์นั้นง่ายต่อการตีความ

โปรไฟล์เมตาบอลิซึม (โดยเฉพาะปัสสาวะและเลือด) สามารถใช้เพื่อกำหนดลักษณะของการเปลี่ยนแปลงทางสรีรวิทยาที่เกิดจากการบริโภคสารพิษในร่างกาย ในหลายกรณี การเปลี่ยนแปลงที่สังเกตได้สามารถให้ลักษณะพิเศษเพิ่มเติมของรอยโรคจำเพาะ เช่น ตับและเนื้อเยื่อไขมัน

การวิเคราะห์เนื้อหาของสเตียรอยด์และไขมันในเลือดมีศักยภาพในการวินิจฉัยที่ดี องค์ประกอบของไขมันของซีรั่มในเลือด ฮอร์โมนสเตียรอยด์ สารตั้งต้นและผลิตภัณฑ์ของการเปลี่ยนแปลงทางเมตาบอลิซึมของพวกมัน เป็นตัวกำหนดลักษณะการทำงานหลายอย่างของสิ่งมีชีวิต สารเหล่านี้มีบทบาทสำคัญในการควบคุมการเผาผลาญและการทำงานของหัวใจและหลอดเลือด และเกี่ยวข้องกับการตอบสนองของร่างกายต่อความเครียดเฉียบพลันและเรื้อรัง

โปรไฟล์สเตียรอยด์เป็นเกณฑ์การวินิจฉัยเฉพาะสำหรับโรคทางนรีเวชและมะเร็งจำนวนหนึ่งที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์และการเผาผลาญของฮอร์โมนสเตียรอยด์ที่บกพร่อง ในขณะที่บางส่วนสามารถวินิจฉัยได้โดยโปรไฟล์สเตียรอยด์เท่านั้น ในการวิเคราะห์โปรไฟล์ ความเป็นไปได้ในการใช้ค่าสัมบูรณ์เป็นตัวแปรง่ายๆ และเปรียบเทียบกับค่าปกตินั้นมีความสำคัญมาก อย่างไรก็ตาม การเปลี่ยนอัตราส่วนของขนาดอาจมีความสำคัญมากกว่า นอกจากนี้ โปรไฟล์สเตียรอยด์ยังให้ข้อมูลเกี่ยวกับสเตียรอยด์จำนวนมากในเวลาเดียวกัน

การกำหนดโปรไฟล์สเตียรอยด์ของซีรั่มในเลือดเป็นวิธีที่มีประสิทธิภาพในการตรวจจับความผิดปกติของการเผาผลาญสเตียรอยด์เกือบทั้งหมดซึ่งช่วยให้คุณใส่

การวินิจฉัยที่แม่นยำในสถานการณ์ทางคลินิกหลายอย่าง เช่น ในต่อมหมวกไต hyperplasia แต่กำเนิด, hyperaldosteronism ชนิดที่ 1, hyperaldosteronism หลัก, โรค Itenko-Cushing, ต่อมหมวกไตไม่เพียงพอ ฯลฯ โปรไฟล์เตียรอยด์มีความสำคัญในการวินิจฉัยความผิดปกติของความแตกต่างทางเพศและการทำงานของเพศ ต่อมเช่นเดียวกับความไม่เพียงพอของต่อมใต้สมองและต่อมหมวกไต

การบริโภคเกลือมากเกินไปซึ่งเป็นส่วนประกอบสำคัญของของเสียจากปุ๋ยโพแทสเซียมในร่างกายของหนูทดลองที่มีน้ำหนักเกินจะนำไปสู่การกระตุ้นการสังเคราะห์อัลโดสเตอโรนมากเกินไปและทำให้ความดันโลหิตสูงและไตถูกทำลายด้วยโรคเมตาบอลิซึม

ในภูมิภาคของการผลิตทางอุตสาหกรรมที่มีการปนเปื้อนสิ่งแวดล้อมในระดับสูง อัตราอุบัติการณ์ของประชากรมักจะสูงกว่าในภูมิภาคที่ค่อนข้าง "สะอาด" เป้าหมายของการวิจัยของเราคือเมือง Soligorsk ซึ่งตั้งอยู่ในเขตการขุดขนาดใหญ่และการแปรรูปแร่โปแตช ในพื้นที่ของเกลือทิ้งและการจัดเก็บกากตะกอนของพืชโปแตช โซนของการทำให้เค็มของโซเดียมคลอไรด์ได้ก่อตัวขึ้น ซึ่งครอบคลุมน้ำใต้ดินถึงระดับความลึกมากกว่า 100 เมตร ซึ่งอาจส่งผลต่อมลพิษของแหล่งน้ำดื่มและอากาศในบรรยากาศ

เพื่อประเมินผลกระทบของมลพิษขององค์ประกอบด้านสิ่งแวดล้อมแต่ละส่วนในภูมิภาคของการผลิตปุ๋ยโปแตชทางอุตสาหกรรม เราได้วิเคราะห์โปรไฟล์ไขมันของซีรั่มในเลือดเพื่อเป็นตัวบ่งชี้ความผิดปกติของการเผาผลาญในระยะเริ่มต้นภายใต้อิทธิพลของส่วนผสมของสารเคมี

จุดมุ่งหมายของงานนี้คือการระบุการเปลี่ยนแปลงการเผาผลาญในสัตว์ทดลองในระหว่างการสัมผัสกับของเสียจากการผลิตโปแตชและการบริโภคน้ำดื่มที่ได้รับจากแหล่งที่อาจได้รับผลกระทบจากของเสียจากการผลิตโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงพร้อมการตรวจจับแมสสเปกโตรเมตรี (HPLC-MS)

วัตถุประสงค์ของการศึกษาคือซีรั่มเลือดของสัตว์ทดลอง (หนูตะเภา) ของกลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุม

วัสดุและวิธีการ

ทำการศึกษาทดลองกับหนูตะเภา 35 ตัว (ตัวเมีย 17 ตัวและตัวผู้ 18 ตัว) น้ำหนัก 305-347 ก.

[ไฮยีน่าและสุขาภิบาล 3/2014

กลุ่มทดลอง (เมล็ดพันธุ์ที่มีของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตชและน้ำดื่มจากระบบประปาของเมือง Soligorsk) 20 คน (หญิง 10 คนและชาย 10 คน)

กลุ่มควบคุม (ไพรเมอร์ด้วยสารละลายไอโซโทนิกโซเดียมคลอไรด์เพื่อขจัดผลกระทบของปัจจัยความเครียดที่เกิดจากขั้นตอนการไพรเมอร์) 15 คน (ตัวผู้ 8 ตัวและตัวเมีย 7 ตัว)

ในระหว่างการทดลอง ทุกวันสังเกตสภาพทั่วไปของสัตว์ การบริโภคอาหารและน้ำ

เพื่อจำลองการสูดดมเรื้อรัง (12 สัปดาห์) ของเสียจากการผลิตปุ๋ยโปแตช MU หมายเลข 11-11-10-2002 "ข้อกำหนดสำหรับการจัดการศึกษาทางพิษวิทยาและภูมิแพ้ในระหว่างการควบคุมสุขอนามัยของละอองลอยที่มีโปรตีนในอากาศ ของพื้นที่ทำงาน" รวมทั้งการกำหนดปริมาณเมล็ดพันธุ์ ตัวอย่างจากการทิ้งเกลือถูกบดในครกหินอ่อนจนมีฝุ่นเป็นเนื้อเดียวกัน ละลายในน้ำกลั่นจนถึงความเข้มข้นที่ต้องการ โดยคำนึงถึงน้ำหนักตัวของสัตว์ทดลอง (น้ำหนักตัวได้รับการตรวจสอบทุกสัปดาห์เพื่อปรับขนาดยา) ปริมาณที่คำนวณได้คือ: ที่จุดเริ่มต้นของการทดลอง - 2.028 มก. / 0.1 ซม. 3 หลังจาก 4 สัปดาห์ - 2.85 มก. / 0.1 ซม. 3 หลังจาก 6 สัปดาห์ - 3.17 มก. / 0.1 ซม. 3 หลังจาก 8 สัปดาห์และจนถึงสิ้นสุดการทดลอง 3.8 มก./0.1 ซม.3

หนูตะเภาที่ไม่มีการดมยาสลบได้รับการแก้ไขในท่าหงายโดยยกศีรษะขึ้น ฉีดสารละลายอุ่น ๆ เข้าไปในรูจมูกสลับกัน (เศษส่วน) (ภายใน 2-3 นาที) ด้วยเครื่องจ่ายปิเปตในลักษณะที่จะไม่จาม เสียง "บีบ" ที่เกิดขึ้นยืนยันการแทรกซึมของสารละลายเข้าไปในทางเดินหายใจ

กลุ่มสัตว์ทดลอง "สูดดม" ส่วนผสมทุกวัน 5 วันต่อสัปดาห์เป็นเวลา 12 สัปดาห์ สัตว์ของกลุ่มควบคุม "สูดดม" น้ำเกลือทางสรีรวิทยา (0.9% NaCl)

สำหรับการเลือกวัสดุทางชีวภาพ สัตว์เหล่านี้ได้รับการดมยาสลบ (การระงับความรู้สึกอีเทอร์) หลังจากการตัดหัว เลือดจะถูกเก็บรวบรวม ได้เซรั่มโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 15 นาที เก็บไว้ที่ -20 C สำหรับการศึกษาเพิ่มเติม วิเคราะห์ฟอสโฟลิปิด ออกซีสเตอรอยด์ และกรดไขมันในเลือด

การเตรียมตัวอย่าง. โปรเจสเตอโรนมาตรฐานภายในถูกเติมลงในซีรัมในเลือดจนกระทั่งถึงความเข้มข้น 10–5 โมลาร์ (10 ไมโครลิตรต่อตัวอย่าง 1 มิลลิลิตร) จากนั้น ในการตกตะกอนโปรตีนที่มีอยู่ในตัวอย่างและสกัดสเตียรอยด์ เมทานอลถูกเติมไปยังความเข้มข้นสุดท้ายที่ 70% (2.33 มล. ของเมทานอลต่อตัวอย่าง 1 มล.) ตามด้วยการหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 15 นาทีที่ 10,000 กรัม โปรตีนที่อยู่ในตัวอย่างก่อให้เกิดตะกอนที่หนาแน่น ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกแยกออกจากเม็ดและผ่านคอลัมน์การแยกเฟสของแข็งที่ปรับสภาพล่วงหน้าซึ่งมีซิลิกาเจลออกทาเดซิลไซลิล 100 มก. คอลัมน์ SFE ถูกปรับสภาพโดยผ่านเมทานอล 2 มล. น้ำ 2 มล. และเมทานอล 70% 2 มล. ตามลำดับ ในระยะแรก คอเลสเตอรอลจะถูกผูกไว้กับคอลัมน์ ซึ่งมีเนื้อหาในเลือดและของเหลวทางชีวภาพอื่นๆ ค่อนข้างสูง รวมทั้งไขมันอื่นๆ ที่ไม่ชอบน้ำสูง หลังจากจับคอเลสเตอร คอลัมน์ถูกล้างเพิ่มเติมด้วยเมทานอล 70% 2 มล. ด้วยปริมาณโคเลสเตอรอลสูงในตัวอย่างหรือตัวอย่างในปริมาณมาก ให้ใช้

ใช้คอลัมน์ TFE ที่มีสารดูดซับสูง สารชะถูกรวมกันและระเหย การระเหยถูกดำเนินการที่ 50°C ในไอพ่นก๊าซเฉื่อย เรซิดิวแบบแห้งถูกละลายในเมทานอล 500 ไมโครลิตรและหมุนเหวี่ยงเป็นเวลา 10 นาทีที่ 10,000 กรัม ในกรณีนี้ สารประกอบที่ไม่ละลายน้ำที่มีขั้วและเมทานอลตกตะกอน ส่วนลอยเหนือตะกอนถูกแยกออกจากตะกอนและเจือจางด้วยน้ำจนถึงความเข้มข้นของเมทานอลที่ 10% สารละลายที่เป็นผลลัพธ์ถูกส่งผ่านคอลัมน์ TFE ที่ปรับสภาพล่วงหน้า (เมทานอล 2 มล. น้ำ 2 มล. และเมทานอล 10% 2 มล. ถูกส่งผ่าน) และล้างด้วยเมทานอล 10% 2 มล. สเตียรอยด์ที่จับกับคอลัมน์ถูกชะด้วยเมทานอล 80% 3 มิลลิลิตร สารละลายถูกระเหยและส่วนที่เหลือของแห้งถูกละลายใน 100 ไมโครลิตรของเมทานอล สารละลายที่เป็นผลลัพธ์ถูกวิเคราะห์โดยใช้ HPLC-MS

การวิเคราะห์ HPLC การวิเคราะห์ดำเนินการบน Accela chromatograph ที่ติดตั้งเครื่องตรวจจับมวลสาร LCQ-Fleet ทำการแยกในคอลัมน์ Cosmosil 5C18-MS-II ด้วยพารามิเตอร์ทางเรขาคณิต 4.6*150 มม. (Nacalai Tesque, Japan)

โปรแกรมแยก (ตัวทำละลาย A - น้ำ, ตัวทำละลาย B - เมทานอล, อัตราการไหล 500 ไมโครลิตร / นาที): เป็นเวลา 5 นาที 60% B, 12 นาที - การไล่ระดับเชิงเส้น 60-95% B, 10 นาที - 95% B, 8 นาที - เชิงเส้น ไล่ระดับ 95-100% B, 5 นาที - 100% B, 5 นาที - 60% B.

สำหรับการวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทรี จะใช้แหล่งกำเนิดไอออไนซ์เคมีของความดันบรรยากาศ (APCI) พารามิเตอร์แหล่งไอออไนซ์: อุณหภูมิระเหย - 350 °C, การไหลของก๊าซแห้ง - 35 หน่วย, การไหลของก๊าซเสริม - 5 หน่วย, อุณหภูมิของเส้นเลือดฝอย - 275 °C, แรงดันเส้นเลือดฝอย - 18 V, แรงดันไฟฟ้าตามวัตถุประสงค์ของไอออน - 80 V. ข้อมูลที่ใช้- โหมดการสแกนแบบพึ่งพา (Data Dependent™) โดยใช้กับดักไอออนในช่วงการสแกน 50-1000 ม./z

โครมาโตแกรมที่ได้จากเครื่องตรวจจับมวลสารในโหมดไอออไนซ์เคมี (กระแสไอออนรวม) ถูกแปลงเป็นรูปแบบข้อความโดยใช้โปรแกรม Qual Browser จากแพ็คเกจ Xcalibur (Thermo Sci ประเทศสหรัฐอเมริกา) ข้อมูลที่ได้รับได้รับการประมวลผลโดยใช้วิธีการองค์ประกอบหลักที่ใช้ในแพ็คเกจ Statistica 10 และเครื่องมือสำหรับการวิเคราะห์คลัสเตอร์และการสร้าง dendrograms คู่มือที่ใช้ในการตีความมวลสเปกตรัมและระบุแต่ละสารประกอบ

ผลลัพธ์และการอภิปราย

เป็นวิธีการเริ่มต้นสำหรับการปรับตัว วิธีการสกัดสเตียรอยด์จากซีรั่มและพลาสมาในเลือดซึ่งอธิบายไว้ในคู่มือของบริษัท "Macherey-Nagel" Solid phase extraction ถูกนำมาใช้ คู่มือการสมัครซึ่งมีคำแนะนำสำหรับการใช้คอลัมน์ SPE เทคนิคการเตรียมตัวอย่างที่ดัดแปลงด้วยการสกัดด้วยเฟสของแข็งทำให้สามารถแยกฟอสโฟลิปิด ไฮดรอกซี-สเตียรอยด์ และกรดไขมันออกจากซีรัมในเลือดของหนูตะเภาได้อย่างมีประสิทธิภาพ

เทคนิคการแยกโครมาโตกราฟีที่อธิบายไว้ทำให้สามารถแยกฮอร์โมนสเตียรอยด์และไขมันในซีรัมได้อย่างมีประสิทธิภาพ

ตัวอย่างถูกวิเคราะห์ตามวิธีการที่อธิบายไว้ ในรูป ตัวอย่าง 1 (ดูปกที่ 2) แสดงโครมาโตแกรมซ้อนทับที่ได้จากการวิเคราะห์ 3 ตัวอย่างจากกลุ่มทดลอง (เน้น

ข้าว. มะเดื่อ 4. สเปกตรัมมวลของสารที่มีเวลาการกักเก็บ 21.5 นาที: a - การแตกตัวเป็นไอออนของสารเคมีที่ความดันบรรยากาศในโหมดลบ b - ไอออนไนซ์ทางเคมีที่ความดันบรรยากาศในโหมดบวก

เป็นสีแดง) และ 3 ตัวอย่างจากกลุ่มควบคุม (เน้นด้วยสีน้ำเงิน) รูปแบบที่คล้ายกันถูกสังเกตในกรณีอื่น

ในการประมวลผลอาร์เรย์ข้อมูลเหล่านี้ จะใช้วิธีการส่วนประกอบหลัก (PCA) และการวิเคราะห์คลัสเตอร์ ซึ่งทำให้สามารถระบุความแตกต่างในโปรไฟล์ไขมันระหว่างกลุ่มควบคุมและกลุ่มทดลองได้ PCA-plot ของส่วนประกอบหลักที่ 1 และ 2 ที่ได้รับ

เมื่อมิติข้อมูลลดลง จะแสดงในรูปที่ 2 (ดูปกที่ 2) บนกราฟ จะเห็นได้ง่าย ๆ ว่าจุดต่างๆ รวมกันเป็น 2 กลุ่ม โดยอยู่ในควอดรันต์ที่ 1, 4 และ 2, 3 ตามลำดับ ในกรณีนี้ จุดที่สอดคล้องกับตัวอย่างทดลองส่วนใหญ่อยู่ในจตุภาคที่ 1 และ 4 จุดที่สอดคล้องกับตัวอย่างกลุ่มควบคุมจะได้รับการแปลเป็นภาษาท้องถิ่นในจตุภาคที่ 2 และ 3 dendrogram ที่ได้จาก

[ไฮยีน่าและสุขาภิบาล 3/2014

การระบุพีคที่มีอยู่ในโครมาโตแกรม

เวลาเก็บรักษา ต่ำสุด จุดสูงสุดหลักในโหมด "+" จุดสูงสุดหลักในโหมด "-"

19,15 393,7 446,8

448,7 493,5 623,4 524,4

19,35 87 227 271 335,5 353,3 371,2 389.1 448.2 493.3 405,4

21,50 316,1 390,0

430.3 448.4 779,1

23,8 319.4 391,6 429.5 783,2

24,35 414,8 448,8

31,73 313,3 330,9

33,9 231.5 245.5 263,3 281,1 295.1 305.2 371.3 521.0 663.1 279,4

สาร

ฟอสฟาติดิลโคลีน

กรดอะราคินิก

กรดฟอสฟาติก 42:4

กรดอาราชิกและโดโคเสต-ทราอีโนอิก

โดโคซาเพนทาอีโนอิก

กรดลิโนเลอิค

ไดไฮดรอกซีโคเลสเตอรอล

การวิเคราะห์ที่เข้มงวดจะแสดงในรูปที่ 3. ดังนั้น การวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูลโครมาโตกราฟีบ่งชี้ถึงความแตกต่างในกระบวนการเผาผลาญที่เกิดขึ้นในสิ่งมีชีวิตของสัตว์ทดลองที่อยู่ในกลุ่มควบคุมและกลุ่มทดลอง

เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงเมตาบอลิซึมที่เฉพาะเจาะจง มวลสเปกตรัมถูกถอดรหัสและระบุ

สารประกอบแต่ละตัวถูกยกมา (ดูตาราง) ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอสำหรับการวิเคราะห์ไม่อนุญาตให้ตรวจพบการเปลี่ยนแปลงในโปรไฟล์ของฮอร์โมนสเตียรอยด์ในซีรัม อย่างไรก็ตาม ลิพิดที่มีขั้วปานกลางถูกตรวจพบบนโครมาโตแกรม

สารประกอบแต่ละชนิดถูกระบุโดยการวิเคราะห์มวลสารของสารที่บันทึกภายใต้โหมดการแตกตัวเป็นไอออนแบบต่างๆ ดังนั้นสเปกตรัมมวลของสารในโหมดไอออไนเซชันสองโหมดที่มีเวลาการกักเก็บ 21.5 นาทีจึงแสดงไว้ในรูปที่ 4. การวิเคราะห์สเปกตรัมนี้พบว่าสารคือ diacyl-sn-glycerophosphate ที่มีน้ำหนักโมเลกุล 780 (R1(311) = กรดไขมัน 20:0 (arachidic), R2(331) = กรดไขมัน 22:4 (docosatetraenoic) ).

พบว่าโครมาโตกราฟีพีคที่มีเวลาเก็บรักษา 42.52 นาทีสอดคล้องกับไดไฮดรอกซีคอเลสเตอรอล สันนิษฐานว่าเป็นหนึ่งในสารตั้งต้นในการสังเคราะห์ทางชีวเคมีของกรดน้ำดี ความแตกต่างในเนื้อหาของ oxysteroids ในซีรัมในเลือดบ่งชี้ว่ามีการละเมิดการเผาผลาญของกรดน้ำดี จะเห็นได้ว่าโครมาโตแกรมที่แสดงในรูปที่ 1 ในซีรัมเลือดของสัตว์ทดลอง มีความเข้มข้นของ oxysteroids เพิ่มขึ้นเมื่อเทียบกับกลุ่มควบคุม (สูงสุดด้วยเวลาเก็บรักษา 35-45 นาที)

บทสรุป. เทคนิคที่ใช้ในงานนี้ทำให้สามารถตรวจหาความผิดปกติของการเผาผลาญไขมันในระยะเริ่มต้นภายใต้อิทธิพลของมลภาวะต่อสิ่งแวดล้อมได้อย่างมีประสิทธิภาพในระดับสูง ผลลัพธ์ที่ได้บ่งชี้ว่าการให้สารละลายเกลือในช่องปากแก่สัตว์ทดลอง Cavia porcellus ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงในการเผาผลาญไขมันและออกซีสเตอรอยด์ โดยเฉพาะอย่างยิ่ง เนื้อหาที่เพิ่มขึ้นของสารตั้งต้นของกรดน้ำดี (ไฮดรอกซีสเตียรอยด์) ในสัตว์อาจสัมพันธ์กับการทำงานของตับบกพร่องและเอนไซม์ที่เกี่ยวข้องกับการสังเคราะห์กรดน้ำดี ดังนั้น วิธีการที่อธิบายไว้จึงสามารถใช้เพื่อตรวจหาความผิดปกติของการเผาผลาญไขมันในผู้อยู่อาศัยในภูมิภาคที่มีมลพิษทางเทคโนโลยี

วรรณกรรม

1. Horning E.C. , Horning M.G. โปรไฟล์เมตาบอลิซึม: วิธีเฟสก๊าซสำหรับการวิเคราะห์เมตาบอลิซึม คลินิก เคมี. 2514; 17(8): 802-9.

2. Constantinou M.A. , Tsantili-Kakoulidou A. , Andreadou I. , Iliodro-mitis E.K. , Kremastinos D.T. , Mikros E. การประยุกต์ใช้เมตาโบโนมิกส์ที่ใช้ NMR ในการตรวจสอบภาวะกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือดกลับคืนมา การปรับสภาพกล้ามเนื้อหัวใจขาดเลือด และการแทรกแซงสารต้านอนุมูลอิสระในกระต่าย ยูโร เจ ฟาร์มา. วิทย์ 2550; 30(3-4): 303-14.

3. Lu W. , Bennett B.D. , Rabinowitz J.D. กลยุทธ์การวิเคราะห์สำหรับเมตาบอลิซึมเป้าหมายตาม LC-MS เจ โครมาโตกร์. ข. นักวิเคราะห์ เทคโนโลยี ไบโอเมด วิทย์ชีวิต 2551; 871(2): 236-42.

4. Novotny M.V, Soini H.A. , Mechref Y. Bioindividualchemicality สะท้อนให้เห็นในโปรไฟล์โครมาโตกราฟี อิเล็กโตรโฟเรติก และแมส-สเปกโตร-เมตริก เจ โครมาโตกร์. ข. นักวิเคราะห์ เทคโนโลยี ไบโอเมด วิทย์ชีวิต 2551; 866(1-2): 26-47.

5. German J.B. , Gillies L.A. , Smilowitz J.T. , Zivkovic A.M. , Watkins S.M. การทำโปรไฟล์ไขมันและไขมันในเมแทบอลิซึม สกุลเงิน ความคิดเห็น ลิพิดอล 2550; 18(1): 66-71.

6. Schwarz E. , Liu A. , Randall H. , Haslip C. , Keune F. , Murray M. et al. การใช้โปรไฟล์สเตียรอยด์โดย UPLC-MS/MS เป็นการทดสอบระดับที่สองในการตรวจคัดกรองทารกแรกเกิดสำหรับภาวะต่อมหมวกไตมากเกินไปแต่กำเนิด: ประสบการณ์ในยูทาห์ กุมาร. ความละเอียด 2552; 66(2): 230-5.

7. Rauh M. การวัดสเตียรอยด์ด้วย LC-MS/MS แอปพลิเคชัน

สู่อาร์ท. ชาคอฟสกีและคณะ

ข้าว. 3. Dendrogram สร้างขึ้นบนพื้นฐานของการวิเคราะห์คลัสเตอร์และแสดงตัวอย่างการจัดกลุ่มตัวอย่างตามกลุ่ม

สู่อาร์ท. ชาคอฟสกีและคณะ

ข้าว. 1. โครมาโตแกรมที่ทับซ้อนกันของตัวอย่าง 1-3 จากกลุ่มควบคุม (เน้นด้วยสีแดง) และ 15-17 จากกลุ่มทดลอง (เน้นด้วยสีน้ำเงิน)

การฉายภาพกรณีบนระนาบแฟคเตอร์ (1 x 2) เคสที่มีผลรวมของโคไซน์สแควร์ >= 0.00

18/3 9/z 21/1 ■ อ้อ

1 เงินกู้ "Sh ประมาณ 28/1" 22/10 41 /1 p

ปัจจัยที่ 1: 65.71%

ข้าว. 2. กราฟที่ได้จากการประมวลผลโครมาโตแกรมโดยใช้ PCA กลุ่มควบคุมถูกเน้นด้วยสีน้ำเงิน กลุ่มทดสอบเป็นสีแดง

1

วิธี HPLC-MS/MS ที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้องได้รับการพัฒนาเพื่อระบุและหาปริมาณอนุพันธ์ของกรดอะมิโนใหม่ของ 1,3,4-ไทอะไดอะโซล LHT7-09 ความไวสูงสุดของการตรวจจับแมสสเปกโตรเมตรี LHT7-09 ทำได้สำเร็จในโหมดการตรวจจับไอออนบวกที่แรงดันไฟฟ้าสเปรย์ 5500 V และศักย์การแยกตัวที่ 36 V ทรานสิชัน MRM ที่ระบุได้ยืนยันโครงสร้างทางเคมีของอนุพันธ์ของกรดอะมิโนใหม่ที่ 1 3,4-ไทอะไดอะโซล เพื่อแยก LHT7-09 ออกจากส่วนผสมที่มีหลายองค์ประกอบของไทอะไดอะโซลิลาไมด์อย่างมีประสิทธิภาพ โหมดเกรเดียนต์ของโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูงได้รับการพัฒนาโดยใช้ส่วนผสมของอะซิโตไนไทรล์และน้ำปราศจากไอออนในอัตราส่วนต่างๆ เป็นสารชะ สำหรับสภาวะทางโครมาโตกราฟีเหล่านี้, เวลาการคงอยู่ของสารประกอบ LHT7-09 ถูกกำหนดให้เป็น 11 นาที สำหรับการกำหนดเชิงปริมาณของสารประกอบ LHT7-09 ได้มีการพัฒนาวิธีการสอบเทียบสำหรับการพึ่งพาพื้นที่ของพีคโครมาโตกราฟีบนความเข้มข้นของสารละลาย

whr-ms/ms

โครมาโตกราฟี

แมสสเปกโตรเมตรี

ไทอะไดอะโซล

1. Kazaishvili Yu.G. , Popov N.S. การศึกษาฤทธิ์ต้านการอักเสบของอนุพันธ์ไทอะไดอะโซลชนิดใหม่ในอาการบวมน้ำที่อุ้งเท้าฟอร์มาลินในหนูแรท / Yu.G. Kazaishvili, N.S. Popov // ปัญหาสมัยใหม่ของวิทยาศาสตร์และการศึกษา - 2556. - ลำดับที่ 3. www..

2. อนุพันธ์ thiadiazole ใหม่ที่มีฤทธิ์ต้านเชื้อรา / A.S. Koshevenko [et al.] // ความก้าวหน้าทางวิทยาวิทยาทางการแพทย์ - 2558. - ต. 14. - ส. 348-351.

3. การสังเคราะห์และฤทธิ์ต้านเนื้องอกของ furyl-2-substituted 1,3,4-thiadiazoles, 1,2,4-triazoles / T.R. Ovsepyan [et al.] // วารสารเคมีเภสัชกรรม - 2554. - ต. 45. - ลำดับที่ 12. - หน้า 3-7.

4. Popov N.S. , Demidova M.A. การประเมินความเป็นพิษเฉียบพลันของอนุพันธ์ของกรดอะมิโนใหม่ของ thiadiazole เมื่อให้ทางช่องท้องแก่หนู / N.S. โปปอฟ แมสซาชูเซตส์ Demidov // วารสารการแพทย์ Upper Volga - 2559. - V. 15, no. 1. - ส. 9-12.

5. Popov N.S. , Demidova M.A. การประเมินการเกิดแผลในกระเพาะอาหารของอนุพันธ์ของกรดอะมิโนใหม่ของ thiadiazole เมื่อให้ยาทางช่องท้องแก่หนู / N.S. โปปอฟ แมสซาชูเซตส์ Demidova // นักศึกษาปริญญาเอก - 2017. - ครั้งที่ 1 (80). - ส. 71-78.

6. การสังเคราะห์และฤทธิ์ต้านจุลชีพของ phenylthio- และ benzylsulfonylacetic acid amides จาก 2-amino-5-alkyl(arylalkyl)-1,3,4-thiadiazoles / S.A. Serkov [et al.] // วารสารเคมีเภสัชกรรม - 2557. - ต. 48 ลำดับที่ 1 - ส. 24-25.

7. Arpit K. , Basavaraj M. , Sarala P. , Sujeet K. , Satyaprakash K. การสังเคราะห์และฤทธิ์ทางเภสัชวิทยาของอนุพันธ์ imidazothiadiazole // Acta Poloniae Pharmaceutica, การวิจัยยา 2559. ฉบับ. 73. เลขที่ 4. หน้า 937-947

8. Eman M. Flefel, Wael A. El-Sayed, Ashraf M. Mohamed การสังเคราะห์และฤทธิ์ต้านมะเร็งของ 1-Thia-4-azaspirodecane ใหม่, Thiazolopyrimidine ที่ได้รับและ 1,3,4-Thiadiazole Thioglycosides // โมเลกุล 2017. เลขที่ 22(1). หน้า 170.

9. ฮอร์เก้ อาร์.เอ. ดิแอซ, เจอราร์โด เอ็นริเก้ กามี. เกลือของ 5-amino-2-sulfonamide-1,3,4-thiadiazole ซึ่งเป็นโครงสร้างและอะนาล็อกของ acetazolamide แสดงคุณสมบัติการยับยั้ง carbonic anhydrase ที่น่าสนใจ ยาขับปัสสาวะ และยากันชัก // Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2559. ฉบับ. 12. เลขที่ 6. หน้า 1102-1110

10. Naiyuan Chen, Wengui D. , Guishan L. , Luzhi L. การสังเคราะห์และฤทธิ์ต้านเชื้อราของสารประกอบ 1,3,4-thiadiazole-thiazolidinone ที่เป็นกรดเป็นกรด 2559. ฉบับ. 20. เลขที่ 4. หน้า 897-905

11. Yomna, I. El-Gazzar, Hanan H. Georgey, Shahenda M. El-Messery การสังเคราะห์ การประเมินทางชีววิทยา และการศึกษาแบบจำลองระดับโมเลกุลของสารยับยั้ง DHFR ใหม่ (1,2,4-triazole หรือ 1,3,4-thiadiazole) - methylthio-derivatives ของ quinazolin-4(3H) -one เป็นตัวยับยั้ง DHFR // เคมีชีวภาพ ฉบับปี 2560 72. หน้า 282-292.

โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงพร้อมการตรวจจับแมสสเปกโตรเมทริกเป็นหนึ่งในวิธีการที่มีแนวโน้มมากที่สุดในการระบุและหาปริมาณยาในวัตถุทางชีววิทยาต่างๆ วิธีการนี้มีลักษณะเฉพาะที่มีความจำเพาะสูง ความแม่นยำ และความสามารถในการระบุสารที่มีความเข้มข้นน้อยที่สุด ซึ่งช่วยให้สามารถใช้สำหรับการกำหนดปริมาณของยาในการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์และการเฝ้าติดตามยา ซึ่งมีความสำคัญสำหรับการวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการทางคลินิก เพื่อจุดประสงค์นี้ จำเป็นต้องพัฒนาและตรวจสอบวิธีการสำหรับการกำหนดปริมาณของสารทางการแพทย์ต่างๆ รวมถึงนวัตกรรมใหม่ โดยอิงตามวิธี HPLC-MS/MS

ยาดั้งเดิมจากกลุ่มยาแก้อักเสบที่ไม่ใช่สเตียรอยด์คือ acexazolamide อนุพันธ์ใหม่ของ 1,3,4-thiadiazole amide และกรดอะเซซามิก ข้อได้เปรียบที่สำคัญของสารประกอบนี้คือความเป็นพิษต่ำและการเกิดแผลในกระเพาะอาหารต่ำ เพื่อดำเนินการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์และประเมินการดูดซึมของสารยาที่กำหนดด้วยเส้นทางการบริหารที่หลากหลาย จำเป็นต้องพัฒนาวิธีการที่เชื่อถือได้สำหรับการกำหนดปริมาณในของเหลวชีวภาพ

วัตถุประสงค์ของการศึกษาครั้งนี้เป็นการพัฒนาวิธีการในการจำแนกและการหาปริมาณของยาต้านการอักเสบที่ไม่ใช่สเตียรอยด์ชนิดใหม่จากกลุ่มอนุพันธ์ของไทอะไดอะโซลโดยใช้ HPLC-MS/MS

วัสดุและวิธีการ

วัตถุประสงค์ของการศึกษาคืออนุพันธ์ของ thiadiazole ใหม่ที่มีรหัสห้องปฏิบัติการ LHT 7-09 ซึ่งสังเคราะห์ที่ JSC "VNTs BAV" (Staraya Kupavna) ศาสตราจารย์ ส.ญ. Skachilova (รูปที่ 1).

2-(5-เอทิล-1,3,4-ไทอะไดอะโซลิล)เอไมด์ของกรด 2-อะซิติลามิโนเฮกซาโนอิก

ข้าว. 1. โครงสร้างทางเคมีของ LHT 7-09 (สูตรรวม: C 12 H 20นู๋ 4 เกี่ยวกับ2ส; มวลโมเลกุล 284.4กรัม/โมล)

ลักษณะการเชื่อมต่อ LHT 7-09 เป็นผงสีขาวซึ่งในทางปฏิบัติไม่ละลายในน้ำ ละลายในแอลกอฮอล์ ละลายได้ง่ายในอะซิโตไนไทรล์

โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงที่ผ่านการตรวจสอบความถูกต้องด้วยวิธีการตรวจจับแมสสเปกโตรเมทริก (HPLC-MS/MS) ถูกใช้เพื่อระบุและหาปริมาณ LCT 7-09

โครมาโตกราฟีดำเนินการโดยใช้โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง Agilent 1260 Infinity II (Agilent Technologies ประเทศเยอรมนี) คอลัมน์การวิเคราะห์ Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 µm 2.1×10 มม. ถูกใช้ในการศึกษา เพื่อแยกสารประกอบภายใต้การศึกษา เราได้พัฒนาโหมดโครมาโตกราฟีแบบเกรเดียนท์ ใช้อะซิโตไนไตรล์ น้ำปราศจากไอออน และแอมโมเนียมอะซิเตตเป็นสารชะในสัดส่วนต่างๆ

สำหรับแมสสเปกโตรเมทรี แมสสเปกโตรมิเตอร์ ABSciexQTrap 3200 MD Triple Quadrupole (ABSciex, สิงคโปร์) ที่มีแหล่งกำเนิดไอออนอิเล็กโตรสเปรย์ (TurboV พร้อมหัววัด TurboIonSpray) ถูกนำมาใช้ แมสสเปกโตรมิเตอร์ถูกสอบเทียบโดยใช้สารละลายทดสอบของ reserpine ที่ความเข้มข้น 6.1×10 -2 มก./ลิตร

การวิเคราะห์แมสสเปกโตรเมทรีของตัวอย่างที่ศึกษาดำเนินการในโหมดอิเล็กโตรสเปรย์ด้วยการฉีดตัวอย่างโดยตรงและชะล้างโดยโครมาโตกราฟี การฉีดโดยตรงของตัวอย่างทดสอบลงในแมสโครมาโตกราฟีดำเนินการโดยใช้ปั๊มหลอดฉีดยาที่มีเส้นผ่านศูนย์กลาง 4.61 มม. ที่อัตรา 10 ไมโครลิตร/นาที

เมื่อพัฒนาเทคนิคในการระบุและกำหนดเชิงปริมาณของอนุพันธ์ thiadiazole ใหม่ ได้เลือกสภาวะที่เหมาะสมที่สุดสำหรับโครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูงและการตรวจจับมวล เวลาออกจากสารจากคอลัมน์โครมาโตกราฟีและการเปลี่ยนแปลง MRM ถูกนำมาพิจารณาด้วย (ทำการลงทะเบียน ม/zสารตั้งต้นไอออนบนควอดรูโพลแรกเชิงวิเคราะห์ Q1 และ ม/zผลิตภัณฑ์ไอออนบนควอดรูโพลวิเคราะห์ที่สอง Q3) สำหรับการกำหนดเชิงปริมาณของ LHT 7-09 กราฟการสอบเทียบถูกสร้างขึ้นในช่วงความเข้มข้นตั้งแต่ 0.397 ถึง 397 ng/ml

AnalystMD 1.6.2.Software (ABSciex) ถูกใช้เป็นซอฟต์แวร์

ผลลัพธ์และการอภิปราย

ในระยะแรกของการศึกษาทดลอง การตรวจจับมวลของตัวอย่างทดสอบดำเนินการโดยการฉีดโดยตรงไปยังเครื่องตรวจจับมวลโดยใช้ปั๊มหลอดฉีดยา ในขั้นตอนการเตรียมตัวอย่าง ได้สารละลายของ LHT 7-09 (500 ng/ml) ในส่วนผสมของอะซิโตไนไทรล์และน้ำแตกตัวเป็นไอออนในอัตราส่วน 2: 1 โดยเติมแอมโมเนียมอะซิเตต (0.1%)

การทดลองเบื้องต้นแสดงให้เห็นว่าในโหมดการตรวจจับไอออนบวก ความไวของการตรวจจับ LCT 7-09 จะสูงขึ้น และสเปกตรัมของมวลมีความเข้มข้นและให้ข้อมูลมากกว่าในโหมดการตรวจจับไอออนลบ ในเรื่องนี้ ในการศึกษาเพิ่มเติม ใช้เฉพาะโหมดไอออไนเซชันเชิงบวกเท่านั้น

เพื่อให้ได้ค่าพีคที่รุนแรง เงื่อนไขการตรวจจับมวลต่อไปนี้ถูกเลือก: : โพลาไรซ์ขั้วบวก แรงดันสเปรย์ไฟฟ้า 5500.0 V ศักย์การแยกตัวและศักย์ไฟฟ้าอินพุต 36.0 และ 6.5 V ตามลำดับ ที่ความดันแก๊สแบบม่าน 20.0 psi และแก๊สสเปรย์ 40.0 psi อัตรา 10 µl/นาที ช่วงการสแกนคือ 270-300 Da

การวิเคราะห์สเปกตรัมมวลที่ได้รับในควอดรูโพลเชิงวิเคราะห์แรก Q1 พบว่าภายใต้สภาวะเหล่านี้ เนื่องจากการเติมไฮโดรเจนโปรตอน โมเลกุลที่ถูกโปรตอนของสารประกอบที่ศึกษา + จะถูกสร้างขึ้นด้วยค่า ม/ z 285.2 ใช่ (รูปที่ 2)

ข้าว. 2. สเปกตรัมมวลของโมเลกุล LHT 7-09 ที่มีโปรตอน (ในโหมดสแกนไอออนบวก +)

ในควอดรูโพลเชิงวิเคราะห์ที่สอง Q3 ไอออนของผลิตภัณฑ์ได้รับการลงทะเบียนสำหรับไอออนของสารตั้งต้นด้วยค่า m/z 285.2 ใช่ การวิเคราะห์สเปกตรัมมวลของลำดับที่ 2 แสดงให้เห็นว่ามียอดเขาหลายแห่ง โดยที่ 3 แห่งมีความเข้มข้นมากที่สุด - m/z 114.2 ดา, m/z 130.2 ดาและ m/z 75.1 ดา (รูปที่ 3).

ข้าว. 3. สเปกตรัมมวลของผลิตภัณฑ์ไอออน (ในโหมดการสแกนไอออนบวก สารตั้งต้น ionม/ z285.2 ใช่)

เพื่อให้ได้สัญญาณไอออนที่มีความเข้มสูง เลือกค่าพลังงานที่เหมาะสมที่สุดในเซลล์การชนกันของไตรมาสที่ 2 (พิจารณาช่วงพลังงานตั้งแต่ 0 ถึง 400 V) สำหรับผลิตภัณฑ์ไอออนที่มีค่า ม/ z 114.2 Da, 130.2 Da และ 75.1 Da พลังงานที่เหมาะสมที่สุดในเซลล์กระแทกคือ ​​27 V ตามลำดับ; 23 V และ 49 V.

สันนิษฐานว่าผลิตภัณฑ์ไอออนที่มีค่า ม/ z 114.2 Da เป็นชิ้นส่วนของ 5-amino-2-ethyl-1,3,4-thiadiazole เนื่องจากการกระจายตัวของอนุพันธ์ 1,3,4-thiadiazole อื่น ๆ ยังเผยให้เห็นผลิตภัณฑ์ไอออนที่มีค่าเท่ากัน ม/ z. ผลิตภัณฑ์ไอออนที่มีค่า ม/ z 130.2 Da น่าจะเป็นชิ้นส่วนที่ถูกโปรตอนของกรดอะเซซามิก ดังนั้นผลการตรวจหามวลของตัวอย่างที่ศึกษาจึงยืนยันโครงสร้างทางเคมีของอนุพันธ์ 1,3,4-thiadiazole ใหม่

ในขั้นต่อไปของการศึกษาทดลอง สารประกอบที่วิเคราะห์ถูกวิเคราะห์โดย HPLC-mass spectrometry

ในโหมด HPLC-MS/MS ใช้สภาวะไอออไนซ์ต่อไปนี้: แรงดันอิเล็กโตรสเปรย์ 5500.0 V, อัตราการไหลของเฟสเคลื่อนที่ 400 ไมโครลิตร/นาที, อุณหภูมิไนโตรเจน 400 °C, แก๊สม่านและแรงดันการไหลของสเปรย์ 20.0 และ 50.0 psi ตามลำดับ อัตราการบันทึกของ single mass spectra คือ 100 spectra ต่อวินาที เพื่อให้ได้มวลสเปกตรัมสรุปบนโครมาโตแกรม ช่วงเวลา 10.5-11.5 นาทีได้รับการจัดสรร ตามความเข้มของสัญญาณของผลิตภัณฑ์ไอออน กราฟเส้นโค้งของการพึ่งพาเวลาของกระแสไอออนและพื้นที่ของยอดของสัญญาณแต่ละตัวที่สอดคล้องกับสารประกอบทดสอบถูกพล็อต ปริมาตรของตัวอย่างที่ฉีดเข้าไปในคอลัมน์วิเคราะห์คือ 10 ไมโครลิตร

เพื่อแยกสารประกอบภายใต้การศึกษา ใช้โหมดเกรเดียนต์ของโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง ซึ่งจัดให้มีขึ้นโดยการเปลี่ยนองค์ประกอบของตัวชะที่ทางเข้าคอลัมน์วิเคราะห์ ใช้อะซิโตไนไตรล์ น้ำปราศจากไอออน และแอมโมเนียมอะซิเตตเป็นสารชะในสัดส่วนต่างๆ ทางเลือกของโหมดเกรเดียนต์ของโครมาโตกราฟีเกิดจากความจริงที่ว่าภายใต้เงื่อนไขของโหมดการชะแบบไอโซเครติก (รวมถึงการใช้ความเข้มข้นที่แตกต่างกันของอะซิโตไนไตรล์) เป็นไปไม่ได้ที่จะได้จุดสูงสุดของสารทดสอบที่มีรูปร่างสมมาตรด้วย เวลาเก็บรักษาที่เหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ จากการศึกษาพบว่าโหมดการจ่ายสารชะต่อไปนี้เหมาะสมที่สุด: จาก 0 ถึง 4 นาทีความเข้มข้นของ acetonitrile เท่ากับ 1%; จาก 4 ถึง 8 นาทีเพิ่มขึ้นเชิงเส้นในความเข้มข้นของ acetonitrile สูงถึง 99%; จาก 8 ถึง 12 นาที - ส่วน isocratic (1% acetonitrile) เมื่อเสร็จสิ้นการศึกษา คอลัมน์โครมาโตกราฟีถูกล้างด้วยสารละลายอะซีโตไนไทรล์ 30% เป็นเวลา 5 นาที

เมื่อใช้โหมดโครมาโตกราฟีที่บรรยายไว้สำหรับสารประกอบที่ศึกษา ได้พีคสมมาตรของความเข้มข้นที่เพียงพอ (รูปที่ 4)

ข้าว. 4. โครมาโตแกรม LHT 7-09 (คอลัมน์วิเคราะห์AgiletPoroshell 120 EC-C18 2.7µm 2.1x10 มม.; โหมดการไล่ระดับสีโครมาโตกราฟี)

การวิเคราะห์โครมาโตแกรมที่ได้รับสำหรับสารละลาย LHT 7-09 ที่มีความเข้มข้นต่างๆ แสดงให้เห็นว่าเวลาการคงอยู่ (tR) ภายใต้สภาวะการชะเหล่านี้คือ 11 นาที และไม่ขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสารทดสอบ ในเรื่องนี้ ค่าของเวลาเก็บรักษาสามารถใช้เป็นเกณฑ์เพิ่มเติมในการยืนยันความถูกต้องของ LHT 7-09 ในสารผสมที่มีหลายองค์ประกอบ เป็นที่น่าสังเกตว่าพารามิเตอร์โครมาโตกราฟีเหล่านี้สามารถใช้เพื่อระบุ LHT 7-09 ได้ ไม่เพียงแต่กับเครื่องตรวจจับมวล แต่ยังรวมถึงเครื่องตรวจจับอื่นๆ

สำหรับการกำหนดเชิงปริมาณของอนุพันธ์ไทอะไดอะโซลใหม่ กราฟการปรับเทียบถูกสร้างขึ้นในช่วงความเข้มข้นตั้งแต่ 0.397 นาโนกรัม/มิลลิลิตร ถึง 397 นาโนกรัม/มิลลิลิตร (รูปที่ 5)

ข้าว. มะเดื่อ 5. กราฟสอบเทียบสำหรับกำหนดความเข้มข้นของ LHT 7-09 (ตามแกน abscissa - ความเข้มข้นของ LHT 7-09 เป็น ng / ml ตามแนวแกน - พื้นที่พีคเป็นพัลส์)

ในการพัฒนาสารละลายสอบเทียบ สารละลาย LHT 7-09 ถูกใช้ที่ความเข้มข้น 0.397; 1.980; 3.970; 19.8; 39.7; 198.0; 397.0 นาโนกรัม/มล. การพึ่งพาอาศัยกันของพื้นที่พีคต่อความเข้มข้นของสารประกอบที่ศึกษาอธิบายโดยสมการถดถอยต่อไปนี้

y= 8.9e 5 x 0.499 , ค่าของสัมประสิทธิ์การถดถอยคือ r=0.9936

ควรสังเกตว่าสารละลายสอบเทียบที่พัฒนาขึ้นทำให้สามารถกำหนดปริมาณของสารประกอบที่ศึกษาได้อย่างแม่นยำในความเข้มข้นที่หลากหลาย ซึ่งทำให้สามารถใช้วิธีนี้ในการประเมินคุณภาพของสารตัวยาและ ดำเนินการศึกษาเภสัชจลนศาสตร์

ดังนั้น ผลการศึกษาจึงเป็นการพัฒนาวิธีการสำหรับการจำแนกและการหาปริมาณของอนุพันธ์กรดอะมิโนใหม่ของไทอะไดอะโซลโดยใช้ HPLC-MS/MS

ข้อสรุป

1. HPLC-MS/MS ช่วยให้สามารถระบุและหาปริมาณอนุพันธ์ของกรดอะมิโนใหม่ของไทอะไดอะโซลได้อย่างแม่นยำสูง
2. การตรวจจับจำนวนมากของอนุพันธ์ thiadiazole LHT 7-09 ควรทำในโหมดการสแกนไอออนบวก (การเปลี่ยน MRM - สารตั้งต้นไอออน Q1 ม/ z 285.2 ใช่; ผลิตภัณฑ์ไอออน Q3 ม/ z 114.2 ดา, ม/ z 130.2 ดาและ ม/ z 75.1 ดา).
3. เพื่อแยก LCT 7-09 ออกจากของผสมที่มีหลายองค์ประกอบ ได้มีการพัฒนาเทคนิคโครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (คอลัมน์วิเคราะห์ Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7 μm 2.1 × 10 มม. ตัวชะ acetonitrile: น้ำปราศจากไอออน: แอมโมเนียมอะซิเตต; โหมดเกรเดียนต์)

ลิงค์บรรณานุกรม

Popov N.S. , Malygin A.S. , Demidova M.A. การพัฒนา HPLC-MS/MS-METHOD สำหรับการระบุและการกำหนดเชิงปริมาณของอนุพันธ์ ThiADIAZOLE ใหม่ // ปัญหาสมัยใหม่ของวิทยาศาสตร์และการศึกษา - 2017. - หมายเลข 5;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=26988 (วันที่เข้าถึง: 01.02.2020) เรานำวารสารที่ตีพิมพ์โดยสำนักพิมพ์ "Academy of Natural History" มาให้คุณทราบ

โครมาโตกราฟีของเหลวที่มีประสิทธิภาพสูง (HPLC) คือวิธีการโครมาโตกราฟีแบบคอลัมน์ซึ่งเฟสเคลื่อนที่ (MP) เป็นของเหลวที่เคลื่อนที่ผ่านคอลัมน์โครมาโตกราฟีที่เต็มไปด้วยเฟสที่อยู่กับที่ (ตัวดูดซับ) คอลัมน์ HPLC มีลักษณะเฉพาะด้วยแรงดันไฮดรอลิกสูงที่ทางเข้าของคอลัมน์ ซึ่งเป็นสาเหตุที่บางครั้ง HPLC ถูกเรียกว่า "โครมาโตกราฟีของเหลวแรงดันสูง"

ขึ้นอยู่กับกลไกของการแยกสาร ตัวแปร HPLC ต่อไปนี้มีความโดดเด่น: การดูดซับ การกระจาย การแลกเปลี่ยนไอออน การยกเว้น ไครัล ฯลฯ

ในโครมาโตกราฟีแบบดูดซับ การแยกสารเกิดขึ้นเนื่องจากความสามารถที่แตกต่างกันในการดูดซับและขจัดออกจากพื้นผิวของตัวดูดซับที่มีพื้นผิวที่พัฒนาแล้ว เช่น ซิลิกาเจล

ในพาร์ติชั่น HPLC การแยกเกิดขึ้นเนื่องจากความแตกต่างในค่าสัมประสิทธิ์การกระจายของสารที่จะแยกระหว่างสิ่งที่อยู่กับที่ (ตามกฎแล้ว กราฟต์ทางเคมีกับพื้นผิวของตัวรองรับที่อยู่กับที่) และเฟสเคลื่อนที่

ตามขั้ว PF และ NF HPLC แบ่งออกเป็นเฟสปกติและเฟสกลับด้าน

โครมาโตกราฟีแบบเฟสปกติเป็นรูปแบบหนึ่งของโครมาโตกราฟีที่ใช้ตัวดูดซับแบบมีขั้ว (เช่น ซิลิกาเจลหรือซิลิกาเจลที่มีกราฟต์ NH 2 หรือกลุ่ม CN) และ PF ที่ไม่มีขั้ว (เช่น เฮกเซนที่มีสารเติมแต่งต่างๆ) ในโครมาโตกราฟีแบบย้อนกลับจะใช้ตัวดูดซับดัดแปลงทางเคมีที่ไม่มีขั้ว (เช่น อนุมูล C 18 อัลคิลที่ไม่มีขั้ว) และเฟสเคลื่อนที่ที่มีขั้ว (เช่น เมทานอล อะซีโตไนไตรล์)

ในโครมาโตกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออน โมเลกุลของสารของของผสมที่แยกตัวออกจากสารละลายเป็นไอออนบวกและแอนไอออน จะถูกแยกออกเมื่อเคลื่อนที่ผ่านตัวดูดซับ (ตัวแลกเปลี่ยนไอออนบวกหรือตัวแลกเปลี่ยนประจุลบ) เนื่องจากอัตราแลกเปลี่ยนที่แตกต่างกันกับกลุ่มไอออนิกของตัวดูดซับ .

ในโครมาโตกราฟีแบบแยกขนาด (ตะแกรง เจลเจาะ กรองเจล) โมเลกุลของสารจะถูกแยกตามขนาดเนื่องจากความสามารถที่แตกต่างกันในการเจาะเข้าไปในรูพรุนของเฟสที่อยู่กับที่ ในกรณีนี้ โมเลกุลที่ใหญ่ที่สุด (โดยมีน้ำหนักโมเลกุลสูงสุด) ที่สามารถเจาะเข้าไปในจำนวนรูพรุนขั้นต่ำของเฟสที่อยู่นิ่งจะเป็นกลุ่มแรกที่ออกจากคอลัมน์ และสารที่มีขนาดโมเลกุลเล็กจะเหลือตัวสุดท้าย

บ่อยครั้งที่การแยกจากกันไม่ได้เกิดขึ้นทีละอย่าง แต่ด้วยกลไกหลายอย่างพร้อมกัน

วิธี HPLC สามารถใช้สำหรับการควบคุมคุณภาพของสารวิเคราะห์ที่ไม่ใช่ก๊าซ สำหรับการวิเคราะห์จะใช้เครื่องมือที่เหมาะสม - โครมาโตกราฟีของเหลว

องค์ประกอบของโครมาโตกราฟีของเหลวมักประกอบด้วยส่วนประกอบหลักดังต่อไปนี้:

– หน่วยเตรียม PF รวมถึงถังที่มีเฟสเคลื่อนที่ (หรือถังที่มีตัวทำละลายแต่ละตัวซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของเฟสเคลื่อนที่) และระบบ PF degassing

– ระบบสูบน้ำ

– เครื่องผสมเฟสเคลื่อนที่ (ถ้าจำเป็น)

– ระบบฉีดตัวอย่าง (หัวฉีด);

– คอลัมน์โครมาโตกราฟี (สามารถติดตั้งในเทอร์โมสตัทได้)

– เครื่องตรวจจับ;

– ระบบรวบรวมและประมวลผลข้อมูล

ระบบสูบน้ำ

ปั๊มจ่าย PF ให้กับคอลัมน์ในอัตราคงที่ที่กำหนด องค์ประกอบของเฟสเคลื่อนที่สามารถคงที่หรือเปลี่ยนแปลงได้ในระหว่างการวิเคราะห์ ในกรณีแรกกระบวนการนี้เรียกว่า isocratic และในขั้นที่สอง - การไล่ระดับสี บางครั้งมีการติดตั้งตัวกรองที่มีเส้นผ่านศูนย์กลางรูพรุน 0.45 µm ก่อนระบบสูบน้ำเพื่อกรองเฟสเคลื่อนที่ ระบบสูบน้ำโครมาโตกราฟีของเหลวที่ทันสมัยประกอบด้วยเครื่องสูบน้ำที่ควบคุมด้วยคอมพิวเตอร์ตั้งแต่หนึ่งเครื่องขึ้นไป สิ่งนี้ทำให้คุณสามารถเปลี่ยนองค์ประกอบของ PF ตามโปรแกรมเฉพาะในระหว่างการไล่ระดับการไล่ระดับสี การผสมส่วนประกอบ PF ในเครื่องผสมอาจเกิดขึ้นได้ทั้งที่แรงดันต่ำ (ก่อนปั๊ม) และที่แรงดันสูง (หลังปั๊ม) เครื่องผสมสามารถใช้สำหรับการเตรียม PF และสำหรับการชะแบบไอโซเครติก อย่างไรก็ตาม อัตราส่วนของส่วนประกอบที่แม่นยำยิ่งขึ้นทำได้โดยการผสมส่วนประกอบ PF ล่วงหน้าสำหรับกระบวนการไอโซเครติก ปั๊ม HPLC เชิงวิเคราะห์ช่วยให้สามารถรักษาอัตราการไหลคงที่ของ PF ลงในคอลัมน์ในช่วง 0.1 ถึง 10 มล./นาทีที่ความดันขาเข้าของคอลัมน์สูงถึง 50 MPa อย่างไรก็ตาม ขอแนะนำว่าค่านี้ไม่เกิน 20 MPa การเต้นของแรงดันจะลดลงด้วยระบบแดมเปอร์พิเศษที่รวมอยู่ในการออกแบบปั๊ม ส่วนการทำงานของปั๊มทำจากวัสดุที่ทนต่อการกัดกร่อน ซึ่งช่วยให้สามารถใช้ส่วนประกอบที่ก้าวร้าวในองค์ประกอบของ PF ได้